Nous avons utilisé un mutant inactif de la PKCζ ou un inhibiteur de la PP2A, l’acide okadaïque (OKA), pour inhiber sélectivement les voies dépendantes de ces protéines dans des cellules exprimant différents niveaux de cavéoline-1, et évalué l’impact de l’insuline et des céramides sur l’activité de la PKB/Akt dans différent sub-domaines de la membrane plasmique.
Bien que la voie de la PKCζ activée par les céramides dans les CEM soit dominante dans les adipocytes, une activation marginale de la voie dépendante de la PP2A, inhibée par l’OKA, a aussi été découverte à l’extérieur des CEM. Pour tester l’importance de ces CEM pour diriger l’action des céramides sur la PKB/Akt, nous avons utilisé des pré-adipocytes qui en sont dépourvus et avons constaté une évolution de l’action négative des céramides sur la PKB/Akt vers la voie PP2A dans ces cellules. De plus, dans des fibroblastes possédant des niveaux faibles de CEM, la voie impliquant la PP2A activée par les céramides dominait, mais pouvait être substituée par la voie dépendante de la PKCζ après surexpression de la cavéoline-1 dans les cellules.
Nos résultats montrent que les céramides peuvent agir négativement sur la PKB/Akt, via deux mécanismes différents, dépendant de la présence de CEM à la membrane, suggérant un rôle critique de ces domaines dans ce processus.