Étude de la formation de jonctions communicantes longue distance (nanotubes) entre cellules de lignées épithéliales bronchiques humaines

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• 作者：Faté ; mé ; h Dubois^a ; Maureen Keller^a ; Elodie Chevalier-Maille^a ; Nicolas Elie^b ; Ludovic Galas^c ; Magalie Benard^c ; Gé ; rard Zalcman^d ; Gué ; naelle Levallet^e ; ^{guenaelle.levallet@unicaen.fr" class="auth_mail" title="E-mail the corresponding author}
• 关键词：Cancer ; RASSF1A ; Nanotubes ; Mitochondries ; GEFH1/Rab11
• 刊名：Morphologie
• 出版年：2016
• 出版时间：September 2016
• 年：2016
• 卷：100
• 期：330
• 页码：183
• 全文大小：48 K

文摘

La perte d’expression de RASSF1A dans les cancers bronchiques non à petites cellules est une altération fréquente (∼25 % des patients atteints). Cette perte altère l’exocytose, en modifiant l’activité des protéines GEFH1 et Rab11. L’objectif du présent travail était de déterminer si des cellules de lignées épithéliales bronchiques humaines (HBEC) n’exprimant plus RASSF1A établissaient davantage de nanotubes et jonctions communicantes longue distance impliquées dans la chimiorésistance.

Matériel et méthode

Les cellules HBEC-3 sont transfectées avec un siARN (inactif, anti-RASSF1A, anti-GEFH1 et/ou anti-Rab11). À 48 h post-transfection, les cellules sont trypsinisées et séparées en deux lots : l’un est incubé en présence d’un Mitotracker-A665 et l’autre d’un Mitotracker-A516. Les deux populations de cellules sont ensuite réensemencées ensemble, puis suivies en temps réel sous microscope à fluorescence pour quantifier l’échange de mitochondries via les nanotubes. Au bout d’une heure de suivi, plusieurs photos sont prises afin de quantifier a posteriori :

– le ratio des cellules ayant échangées des mitochondries ;

– le nombre et la taille moyenne des nanotubes par cellule.

Résultats

Comme le montre l&rsquo;augmentation du pourcentage de cellules ayant échangées des mitochondries lorsqu&rsquo;elles n&rsquo;expriment plus RASSF1A ou GEFH1, nous rapportons ici, que l&rsquo;extinction de RASSF1A ou GEFH1 augmente significativement de près de 2 fois le nombre de nanotubes présent par cellule ainsi que leur longueur (*p < 0,05). En revanche, l&rsquo;invalidation simultanée de Rab11 et RASSF1A par siRNA induit une diminution significative de ces nanotubes et donc des échanges intercellulaires.

Conclusion

Cette étude révèle que la perte d&rsquo;expression de RASSF1A favorise l&rsquo;établissement de nanotubes et ainsi l&rsquo;échange de mitochondries entre cellules épithéliales bronchiques humaines, en activant la machinerie d&rsquo;exocytose, prérequis à la mise en place des nanotubes. La perte d&rsquo;expression de RASSF1A par les cellules cancéreuses pourrait ainsi leur permettre de survivre dans un environnement défavorable/hypoxique, par échange notamment de mitochondries.