APLICACI脫N Y VALIDACI脫N DE DOS T脡CNICAS DE AN脕LISIS DE METILACI脫N, (METHYLIGHT Y MS-MLPA) PARA EL DIAGN脫STICO DE S脥NDROME DE LYNCH

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• 作者：L. Pé ; rez-Carbonell^a ; C. Alenda^b ; A. Payá ; ^b ; C. Guillé ; n^c ; A. Castillejo^c ; V. Barberá ; ^c ; J.L. Soto^c ; R. Jover^d
• 刊名：Gastroenterolog铆a y Hepatolog铆a
• 出版年：2009
• 期刊代码：pca167_02105705
• 类别：med
• 出版时间：March 2009
• 卷：32
• 期：3
• 页码：194
• 文件大小：41 K

摘要

Al menos una tercera parte de los casos de c谩ncer colorrectal (CCR) que re煤nen criterios de Bethesda revisados y presentan p茅rdida de expresi贸n de MLH1 son casos espor谩dicos debidos a hipermetilaci贸n de este gen y no deber铆an recibir an谩lisis gen茅tico. El objetivo de este estudio es investigar el papel de un m茅todo nuevo y sencillo de determinaci贸n de la metilaci贸n de MLH1, el MS-MLPA (Methylation Specific-Multiplex Ligation Probe Amplification), en la selecci贸n de pacientes para diagn贸stico gen茅tico de s铆ndrome de Lynch. El MS-MLPA tiene la ventaja de no requerir modificaci贸n previa del ADN y ser una t茅cnica sencilla y disponible para cualquier laboratorio de biolog铆a molecular.

M茅todos

Se ha analizado 60 casos de CCR con p茅rdida de expresi贸n de MLH1. El DNA procedente de muestras parafinadas de estos tumores ha sido estudiado con 2 m茅todos cuantitativos de detecci贸n de metilaci贸n: 1. Methylight (Applied Biosystems), considerado como 鈥済old-standard鈥?y 2. MS-MLPA (MCR Holland). La presencia de mutaci贸n som谩tica V600E en el gen BRAF tambi茅n fue investigada en el DNA tumoral. A todos los pacientes les fue realizado estudio de mutaci贸n germinal de MLH1 por secuenciaci贸n.

Resultados

La correlaci贸n de los resultados cuantitativos obtenidos con las 2 t茅cnicas de estudio de metilaci贸n (Methylight y MS-MLPA) fue del 96,7%(p<0,001). Se encontraron mutaciones germinales en MLH1 en 8 de los 60 pacientes (13,3%). Ninguno de los tumores procedentes de pacientes con s铆ndrome de Lynch mostr贸 metilaci贸n de MLH1 en tejido tumoral con ninguna de las 2 t茅cnicas. Cuarenta y dos de los 52 casos sin mutaci贸n germinal de MLH1 (80%) presentaban metilaci贸n significativa en tejido tumoral cuando se analiz贸 con Methylight. Utilizando MS-MLPA, se encontr贸 metilaci贸n en 44 de estos 52 casos (85%). Ambas t茅cnicas mostraron una sensibilidad y valor predictivo negativo del 100%para detectar mutaci贸n geminal en MLH1. La especificidad fue del 80%para el Methylight y del 85%para el MS-MLPA. El valor predictivo positivo fue del 44%para Methylight y del 50%para MS-MLPA. Estos valores fueron superiores a los obtenidos utilizando la mutaci贸n BRAF, con una especificidad del 53,8%.

Conclusi贸n

El an谩lisis de metilaci贸n de MLH1 es una t茅cnica con alta sensibilidad y especificidad para la detecci贸n de casos de CCR espor谩dico con inestabilidad de microsat茅lites. El uso de MS-MLPA como t茅cnica sencilla de estudio de metilaci贸n de MLH1 puede ser un elemento de gran utilidad en el algoritmo selecci贸n de pacientes con CCR para test gen茅tico del s铆ndrome de Lynch.