鲑精蛋白基因在大肠杆菌BL21中的克隆与表达
- 作者：王春晓鲁健章邓强刘承初刘景晶
- 会议时间：2006-08-02
- 关键词：鲑精蛋白 ; 克隆 ; 基因工程 ; 抗菌
- 作者单位：王春晓,鲁健章,邓强,刘承初(上海水产大学食品学院海洋生物制药教研室,上海,中国,200090)刘景晶(中国药科大学生命科学与技术学院微基因药学实验室,南京,中国,210009)
- 母体文献：全国海洋生物技术与海洋药物学术会议论文集
- 会议名称：2006全国海洋生物技术与海洋药物学术会议暨全国第九届海洋药物学术研讨会
- 会议地点：大连
- 主办单位：中国药学会
- 语种：chi
摘要
为了扩大鲑精蛋白的来源,以充分利用其抗菌活性,本文报道了用基因工程方法取代传统从鲑鱼精子提取方法生产鲑精蛋白的可能性.我们设计了一个基于鲑精蛋白的重组线性肽.选取大肠杆菌偏爱的密码子设计了三段引物,用于合成编码鲑精蛋白的基因.通过引物互补PCR技术获得能表达鲑精蛋白的基因片段.将得到的基因片段插入到pED质粒(pED是将含有消去了唯一酸水解位点的L-天门冬酰胺酶C末端的基因片段插入到pET28a的BamHI和HindIII之间重组而得到)中L-天门冬酰胺酶C末端127肽基因后面,构成融合蛋白基因,并预留酸水解位点,构成表达载体pED-salmin.重组质粒片段的DNA测序结果表明,它与原设计编码鲑精蛋白的核苷酸序列完全一致.嵌合基因高水平表达(SDS-PAGE电泳平板上出现新的2万道尔顿的蛋白),融合蛋白以包涵体的形式存在于大肠杆菌BL21中.