基于Eu~(3+)标记的喹乙醇TRFIA研究
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摘要
为了评价Eu~(3+)免疫探讨标记喹乙醇克隆抗体的效果,以环化二乙烯三胺五醋酸酐(cy DTPA)为螯合剂,将Eu~(3+)偶联到喹乙醇单克隆抗体(OLA-m Ab)上,制备喹乙醇铕标抗体(Eu~(3+)-OLA-m Ab),并在此基础上进行TRFIA反应条件的优化。结果表明,优化后的直接竞争时间分辨荧光免疫分析(TRFIR)反应条件为包被抗原(OLA-OVA)浓度1.2μg·m L-1、铕标抗体浓度2.0μg·m L-1、CBS浓度0.05 mol·L-1、PBS稀释液0.01 mol·L-1、p H值7.0,采用含5%甲醇的PBS配制喹乙醇标样。反应条件筛选优化后建立标准曲线,其IC50和IC10浓度分别为9.29、0.66 ng·m L-1。以饲料为样品进行添加回收率试验,其回收率处于84.80%~113.60%之间,变异系数小于14%。本研究建立的TRFIA方法具有灵敏度高、稳定性好等特点,为下一步研发喹乙醇TRFIA快速检测试剂盒奠定了基础。
In order to evaluate the effect of daguindox monoclonal antibody on Eu~(3+)labeling,the Eu~(3+)was conjugated to OLA-m Ab by cy DTPA to obtain the Eu~(3+)-OLAm Ab. The optimal conditions of coating antigen( OLA-OVA),Eu~(3+)-OLAm Ab,coating buffer( CBS),ionic strength of PBS and organic solvent were 1. 2 μg·m L-1,2. 0 μg·m L-1,0. 05 mol·L-1,0. 01 mol·L-1( p H value 7. 0) and 5% methnol-PBS,respectively. Finally,a sigmoid standard curve of OLA was established with the IC50 value of 9. 29 ng·m L-1 and the IC10 value of 0. 66 ng·m L-1. The average recoveries of determination for OLA spiked in feedstuff were between 84. 80 ~ 113. 60%,and their mean coefficients of variation were below 14%. The established direct-competitive TRFIA method which has the advantages of high sensitivity and good stability lays the foundation for development of OLA immunoassay kit.
In order to evaluate the effect of daguindox monoclonal antibody on Eu~(3+)labeling,the Eu~(3+)was conjugated to OLA-m Ab by cy DTPA to obtain the Eu~(3+)-OLAm Ab. The optimal conditions of coating antigen( OLA-OVA),Eu~(3+)-OLAm Ab,coating buffer( CBS),ionic strength of PBS and organic solvent were 1. 2 μg·m L-1,2. 0 μg·m L-1,0. 05 mol·L-1,0. 01 mol·L-1( p H value 7. 0) and 5% methnol-PBS,respectively. Finally,a sigmoid standard curve of OLA was established with the IC50 value of 9. 29 ng·m L-1 and the IC10 value of 0. 66 ng·m L-1. The average recoveries of determination for OLA spiked in feedstuff were between 84. 80 ~ 113. 60%,and their mean coefficients of variation were below 14%. The established direct-competitive TRFIA method which has the advantages of high sensitivity and good stability lays the foundation for development of OLA immunoassay kit.
引文
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