TRIM28对肿瘤睾丸抗原HCA587/MAGEC2转录后的调控作用
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摘要
研究背景:HCA587/MAGEC2是肿瘤睾丸抗原,在正常组织中仅表达于睾丸,然而在多种肿瘤组织中异常表达。目前研究发现,在多种类型肿瘤中,HCA587/MAGEC2的表达与不良预后相关,且已有越来越多的证据表明MAGEC2在肿瘤的发生发展中起着重要的作用。迄今为止,对于MAGEC2表达调控方面的研究甚少,我们发现与HCA587/MAGEC2结合的TRIM28(又称为KAP-1,TIF1)对HCA587/MAGEC2的表达具有调控作用。目的:研究TRIM28对HCA587/MAGEC2表达的调控作用及其机制。方法:用小干扰RNA特异下调内源性表达HCA587/MAGEC2的人黑色素瘤细胞系A375和Hs 695T中TRIM28的表达,利用实时定量PCR和Western blot方法,在mRNA和蛋白水平检测TRIM28下调后,MAGE-C2的mRNA和蛋白水平的表达情况。在A375和Hs695T细胞中敲低TRIM28后,用蛋白酶体抑制剂MG132和溶酶体抑制剂氯喹两种药物分别处理细胞,观察这两种细胞中肿瘤睾丸抗原MAGE-C2的蛋白水平变化;用放线菌酮CHX药物处理细胞,观察MAGEC2的蛋白降解速率与对照组相比,是否发生变化。将HCA587/MAGEC2基因的5’和3’非编码区分别克隆到萤光素酶报告基因载体,转染A375和Hs 695T细胞后观察敲低TRIM28后萤光素酶的活性。利用免疫组织化学染色的方法检测TRIM28和MAGEC2在原发性肝细胞癌组织中的表达。结果:在人黑色素瘤细胞系A375和Hs 695T中,特异下调TRIM28的表达后,可看到HCA587/MAGEC2蛋白水平显著降低,但HCA587/MAGEC2mRNA水平无明显变化;用MG132或氯喹处理后,MAGEC22蛋白水平并没有明显回升。用CHX药物处理后,TRIM28敲低组与对照组相比,MAGE-C2的降解速率没有明显变化。萤光素酶活性分析提示TRIM28对HCA587/MAGEC2蛋白水平的调控主要作用于HCA587/MAGEC2基因的3’非编码区。肝癌组织标本的分析显示TRIM28和HCA587/MAGEC2蛋白的表达呈显著正相关。结论:TRIM28可通过转录后的调控机制对肿瘤睾丸抗原HCA587/MAGEC2在肿瘤细胞内的表达水平起调控作用,但并不依赖于蛋白酶体降解途径。
引文