利用蛋白抗体芯片技术筛选盐胁迫下红罗非鱼鳃差异表达蛋白的初步研究
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- 英文论文题名：Ab Mart protein chip screening the gill differentially expressed proteins with salinity of Red Tilapia
- 论文作者：黄思颖 ; 赵金良 ; 王燕 ; 赵永华 ; 赵岩
- 英文论文作者：HUANG Siying ; ZHAO Jinliang ; WANG Yan ; ZHAO Yonghua ; ZHAO Yan ; Laboratory of Freshwater Fisheries Germplasm Resource ; Ministry of Agriculture ; Shanghai Ocean University
- 年：2016
- 作者机构：上海海洋大学农业部淡水水产种质资源重点实验室;
- 论文关键词：红罗非鱼 ; 鳃 ; 盐胁迫 ; 蛋白质芯片 ; 差异表达蛋白
- 英文论文关键词：Red Tilapia ; Gill ; Salinity stress ; Protein chip ; Differentially expressed proteins
- 会议召开时间：2016-11-02
- 会议录名称：2016年中国水产学会学术年会论文摘要集
- 语种：中文
- 分类号：S917.4
- 学会代码：OGSB
- 会议名称：2016年中国水产学会学术年会
- 会议地点：中国四川成都
- 主办单位：中国水产学会、四川省水产学会
- 学会名称：中国水产学会
- 页数：1
- 文件大小：508k
- 原文格式：D
- 会议级别：全国
摘要
罗非鱼作为广盐性种类,本文利用蛋白抗体芯片技术(艾比玛特生物医药(上海)有限公司自主研发的具有4×104高通量的单克隆抗体芯片)筛选盐胁迫下的红罗非鱼鳃组织差异表达蛋白质组,初步筛选得到40个芯片差异抗体,IHE、IP实验验证出3个候选蛋白差异表达抗体的样本:92-B9、263-B2、304-B8,通过质谱技术和数据库检索鉴定,样本263-B2、304-B8分别得到一个候选差异蛋白:中间丝蛋白(GEAP)、转运蛋白(SEC63),样本92-B9抗体包含3个候选蛋白,分别是中丝蛋白(GEAP)、ATP合酶α亚基(ATP5A)、二硫化物异构酶(PDI A3)。采用免疫组化及Western Blot技术对上述筛选结果进行进一步验证,263-B2、92-B9免疫组化在鳃小片基部均有阳性反应,Western结果显示蛋白表达量随着盐浓度的增加(0、10、20、30g/L NaCl)而升高,两者呈正比关系,与抗体芯片筛选结果一致;304-B8免疫组化在鳃小片基部以及鳃丝部位有阳性反应,但western blot实验无条带,可能分析免疫组化存在假阳性。根据本研究结果,认为中间丝蛋白(GEAP)、ATP合酶α亚基(ATP5A)、二硫化物异构酶(PDI A3)是受盐胁迫的相应蛋白,它们通过维持细胞骨架相关、参与内质网蛋白加工修饰参与盐胁迫调节。
As a wildlly Salt-Resistance species,this paper application of Ab Mart proteomics technology screening the Red Tilapia's gill differentially expressed proteins with salinity stress.Screening from the 40 couples differentially expressed antibodies to detect with the method of immunohistochemistry and immunoprecipitation, sample 92-B9 、 263-B2 、 304-B8 were verified,meanwhile use MALDI-TOF-TOF-MS/MS Proteomics technology have identified two proteins which were intermediate filament protein ON3-like(GEAP)and translocation protein SEC63(SEC63)in each sample 263-B2、304-B8, sample 92-B9 including 3 candidates proteins:GEAP、ATP synthase subunit alpha, mitochondrial-like(ATP5A)、protein disulfide-isomerase A3(PDI A3).
As a wildlly Salt-Resistance species,this paper application of Ab Mart proteomics technology screening the Red Tilapia's gill differentially expressed proteins with salinity stress.Screening from the 40 couples differentially expressed antibodies to detect with the method of immunohistochemistry and immunoprecipitation, sample 92-B9 、 263-B2 、 304-B8 were verified,meanwhile use MALDI-TOF-TOF-MS/MS Proteomics technology have identified two proteins which were intermediate filament protein ON3-like(GEAP)and translocation protein SEC63(SEC63)in each sample 263-B2、304-B8, sample 92-B9 including 3 candidates proteins:GEAP、ATP synthase subunit alpha, mitochondrial-like(ATP5A)、protein disulfide-isomerase A3(PDI A3).
引文