利用噬菌体展示技术筛选的痤疮丙酸杆菌B细胞表位能有效地异源抵抗小鼠感染猪胸膜肺炎放线杆菌
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- 论文作者：刘建方 ; 马秋月 ; 杨峰 ; 秦万海 ; Paul R.Langford ; 韩文瑜 ; 雷连成
- 年：2016
- 作者机构：中国吉林省长春市吉林大学动物医学学院;英国伦敦帝国理工大学;
- 论文关键词：痤疮丙酸杆菌 ; 胸膜肺炎放线杆菌 ; 噬菌体展示技术 ; B细胞表位 ; 异源保护
- 会议召开时间：2016-09-18
- 会议录名称：第六届中国兽药大会论文集
- 英文会议录名称：Proceedings of 2016 the 6th China Congress of Veterinary Medicine
- 语种：中文
- 分类号：S852.61
- 学会代码：ZGXJ
- 会议名称：第六届中国兽药大会
- 会议地点：中国四川成都
- 主办单位：中国兽医药品监察所、中国兽药协会
- 学会名称：中国畜牧兽医学会
- 页数：1
- 文件大小：66k
- 原文格式：O
- 会议级别：全国
摘要
猪传染性胸膜肺炎是由猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumonia,APP)引起的一种高度传染性、致死性呼吸道疾病,给世界养猪业造成了巨大的经济损失。由于该病原菌血清型众多,各血清型间交叉保护性不强,且常伴随其它病原菌混合感染,给该病的治疗带来了巨大挑战。近年来,针对预防该病的研究主要集中在亚单位疫苗上,主要体现在对该病原菌外毒素、外膜蛋白、脂多糖、菌毛等亚结构的研究上,虽然国内外已有诸多报道,但一直未有效果理想的、针对多血清型起交叉保护的疫苗问世,疫苗的发展较为缓慢。课题组在研究各血清型APP差异基因时意外发现痤疮丙酸杆菌(Propionibacterium acnes,PA)抗血清能与APP发生血清学特异性反应,被动免疫抗PA血清后可使小鼠有效抵抗APP感染,说明PA与APP之间可能存在的共同抗原诱导产生的共同抗体发挥着重要作用。因此,为了寻找PA与APP之间具有交叉保护作用的共同抗原表位,利用噬菌体展示技术构建了PA全基因组噬菌体展示文库,库容量为105。利用APP免疫兔产生的高免血清对构建的抗原多肽库进行三轮特异性选择,获得42个阳性克隆,测序分析后属于10个PA与APP共同抗原蛋白。利用B细胞表位预测程序BepiPred 1.0b和ABCpred对筛选到的蛋白进行表位预测,并与GenBank中APP1标准株进行比对,获得6个与APP1同源率高的PA表位,生物合成多肽后做进一步分析。发现抗PA血清和抗APP1血清均能识别多肽Ba1、Ba2、Bb4、Bb5、C1,且抗Ba1、Bb5、C1血清也能较好地识别并结合PA和APP1。Ba1、Bb5、C1免疫组1gG、IL-4水平及CD4~+/CD8~+T细胞均明显高于对照组,说明能够充分引起机体的免疫应答,且以体液免疫应答为主。但间接免疫荧光结果显示抗C1血清与APP1识别结合能力较弱。为了评价多肽的保护效果,将Ba1、Bb5分别免疫小鼠后进行攻毒,与对照组相比,免疫组均能有效保护小鼠抵抗APP1的感染,保护率均为80%。两者联合免疫小鼠后,可使小鼠同时抵抗APP1、APP5感染,保护率分别达到80%和90%。因此,PA表位多肽Ba1、Bb5能够有效异源预防APP1、APP5感染,这为APP多血清型交叉感染提供新的研究方向,对新型亚单位疫苗的研制具有重要的意义。
引文