人工感染鸭源新城疫病毒对鸭免疫功能作用的分子机制
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摘要
新城疫(Newcastle Disease,ND)是由新城疫病毒(Newcastle Disease Virus,NDV)引起的禽类烈性传染病,在全球广泛流传,严重制约着养禽业的发展和禽产品安全。传统理论认为,鸭对NDV不敏感,但从NDV的演化进程看,有导致鸭ND流行的危险。因此深入了解NDV感染后,鸭先天免疫因子抗病毒作用的信号转导机制,对提高鸭的机体免疫力,降低感染概率显得极为重要。选用39只20日龄SPF绍鸭,随机分为攻毒组27只和对照组12只。对照组不攻毒,攻毒组采用点眼滴鼻的途径接种鸭源NDV强毒(Md/CH/LGD/1/2005)。分别在攻毒后的24 h和48 h,从对照及攻毒组各随机取6只鸭屠宰,分别采集肾脏、肺脏、气管、腺胃、骨髓、脾脏、盲肠扁桃体、哈德氏腺、法氏囊等9个组织。剩余15只鸭子每天持续观察,并于攻毒后24、48、72 h、5天采集咽喉及泄殖腔拭子,以确定排毒和排毒时间。每隔4天采血一次直至24天对其抗体变化进行检测。采集的全部组织运用实时荧光定量RT-PCR法检测Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)、鸭防御素(Avian beta defensins,AvBDs)、细胞因子和相关免疫因子表达量的变化。结果显示:感染鸭源NDV强毒后,鸭没有发病和死亡情况发生,但能够诱导鸭体内产生NDV特异抗体。经NDV感染后,定量RT-PCR检测结果显示,TLR2、3、7在脾脏中显著升高(P<0.05);RIG-I在脾脏、盲肠扁桃体和哈德氏腺等免疫器官中上调显著(P<0.05);AvBD5、16在脾脏中被诱导表达(P>0.05);IL-2在哈腺中表达量显著增加(P<0.05),IL-6在脾脏中的表达量显著增加(P<0.05)。IFN-γ在肾脏、脾脏中表达量明显升高,TLR3在脾脏中表达量增加与调控蛋白ERK2及凋亡基因Caspase3在脾脏中变化趋势相同,且差异显著(P<0.05)。以上结果提示,绍鸭对鸭源NDV(Md/CH/LGD/1/2005)不敏感,但感染后机体能够产生特异抗体。经鸭源NDV感染后,AvBD5及AvBD16在脾脏组织中表达量显著升高可能与TLR2、3、7介导的信号转导通路有关。IL-2、IFN-γ等细胞因子的表达量发生显著变化,可能与鸭AvBD5、16协同参与鸭体对新城疫病毒感染的免疫反应。TLR3表达量的升高可能引起调控蛋白ERK磷酸化,使Caspase3激活促进细胞凋亡。
引文