SR-B1基因多态性对HCV感染性的影响
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- 论文作者：许刚 ; 关默 ; 赵平 ; 王文 ; 任浩 ; 戚中田
- 年：2012
- 作者机构：第二军医大学微生物学教研室上海市医学生物防护重点实验室;
- 会议召开时间：2012-10-12
- 会议录名称：第三届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛论文汇编
- 语种：中文
- 分类号：R512.63
- 学会代码：WSWZ
- 会议名称：第三届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛
- 会议地点：中国浙江杭州
- 主办单位：中国微生物学会临床微生物学专业委员会、《医学参考报》微生物学与免疫学频道编委会、宁波大学医学院附属医院
- 学会名称：中国微生物学会临床微生物学专业委员会
- 页数：1
- 文件大小：57k
- 原文格式：O
- 会议级别：全国
摘要
目的:B族Ⅰ型清道夫受体(SR-B1)是丙型肝炎病毒(HCV)入侵的首位受体分子,同时也是体内胆固醇运输的重要受体,已有多项研究证明脂蛋白通过与SR-B1、病毒三者间的相互作用在病毒入侵时发挥重要作用。全基因组单核苷酸多态性位点(single nucleotide polymorphisms,SNPs)与疾病间的关系近年来备受关注。SR-B1在人群中存在基因变异,本研究拟分析SR-B1 SNPs对HCV感染性的影响。方法:定点突变构建SR-B1SNPs突变体表达质粒,构建SR-B1的shRNA慢病毒载体,转染293T细胞。在24小时和48小时收集细胞上清感染Huh-7.5.1细胞,G418筛选Huh-7.5.1/SR-B1-细胞;野生型和突变型SR-B1分别转染Huh-7.5.1/SR-B1-细胞,48小时后用HCVcc和HCVPp感染,免疫荧光测定感染性;在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中转染同剂量的野生型与突变型的SR-B1,通过RT-PCR以及WB检测SR-B1的mRNA以及蛋白的表达水平;通过慢病毒感染的方法构建稳定表达野生型和突变型SR-B1的CHO细胞,流式细胞术分析细胞与病毒以及包膜蛋白E2的结合能力;用带有荧光标记的HDL(Alexa-HDL)与稳定表达野生型和突变型SR-B1的CHO细胞孵育,流式细胞术检测结合力。结果:获得Huh-7.5.1/SR-B1-细胞系的基础上,筛选到3个对病毒感染有影响的SNPs位点,分别为:S112F突变体减弱病毒的感染,T175A、P297S突变体增强病毒的感染。SR-B1突变体在细胞中的分布没有发生改变,与野生型一样在细胞膜以及细胞质中都有分布。所有突变体中除了S112F以外都对基因的表达没有影响。S112F突变降低了蛋白的表达,但对RNA水平没有影响,分析可能是突变改变了RNA的结构,降低了翻译效率。3个突变中T175A、P297S突变增强了病毒以及包膜蛋白与SR-B1的结合,而S112F突变后却有微弱的降低。这与对病毒感染性的影响结果一致。携带着3个突变的人群体内的胆固醇水平较正常人高,通过流式分析所有突变型的SR-B1与HDL的结合都较野生型低。这说明突变减弱SR-B1与HDL的结合从而减低胆固醇的运输效率,引起体内的胆固醇水平上升。结论:从HCV的受体分子SR-B1上找到与病毒易感性相关SNPs位点,并在体外细胞水平上证实,为后续研究提供了理论依据。
引文