组成型表达猪抗菌肽PF1和PR39重组干酪乳杆菌的构建及生物学活性分析

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• 论文作者：张蕾 ; 姜艳平 ; 崔文 ; 王丽 ; 周晗 ; 乔薪瑗 ; 刘敏 ; 李一经 ; 徐义刚 ; 唐丽杰
• 年：2016
• 作者机构：东北农业大学动物医学学院;
• 论文关键词：猪抗菌肽PR39 ; 猪抗菌肽PF1 ; 干酪乳杆菌 ; 组成型表达 ; 生物学活性
• 会议召开时间：2016-09-18
• 会议录名称：第六届中国兽药大会论文集
• 英文会议录名称：Proceedings of 2016 the 6th China Congress of Veterinary Medicine
• 语种：中文
• 分类号：S816.7
• 学会代码：ZGXJ
• 会议名称：第六届中国兽药大会
• 会议地点：中国四川成都
• 主办单位：中国兽医药品监察所、中国兽药协会
• 学会名称：中国畜牧兽医学会
• 页数：1
• 文件大小：72k
• 原文格式：O
• 会议级别：全国

摘要

为开发绿色环保抗菌制剂,作为饲料添加剂应用于生产实践,本研究以猪源抗菌肽PR39和PF1为研究对象,利用益生菌干酪乳杆菌构建了组成型融合表达PF1-PR39的重组乳酸菌系统rLpPG612-PPH-PF1-PR39,经Western blot和间接免疫荧光法鉴定,重组抗菌肽获得正确表达。采用动态生长曲线法和琼脂扩散法检测了重组肽抗大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、巴氏杆菌、李斯特氏菌、鼠伤寒沙门氏菌和铜绿假单胞杆菌的活性,结果表明重组猪源抗菌肽PF1-PR39对大肠埃希氏菌、巴氏杆菌、鼠伤寒沙门氏菌和铜绿假单胞菌具有抑菌活性,而抗李斯特氏菌和金黄色葡萄球菌的活性不明显。为检测重组干酪乳杆菌促进动物生长作用,以BALB/c小鼠为对象进行了系统研究:连续灌服重组干酪乳杆菌21天,统计平均日采食量(ADFI)、平均日增重(ADG)和料重比(F/G);采集免疫BALB/c小鼠肠黏液和血清等样本,采用ELISA方法检测免疫小鼠血清样本中IgG、IgM抗体水平,肠黏液样本中的sIgA抗体水平,以及TGF-β、TNF-α、IFN-γ、IL-4、IL-6等细胞因子水平;对免疫小鼠攻毒产肠毒素大肠埃希氏菌和鼠伤寒沙门氏菌,以评价重组干酪乳杆菌对小鼠的保护作用,并检测其排菌情况。结果表明:灌服重组菌rLpPG612-PPHPF1-PR39的小鼠平均日增重极显著提高(p<0.01),料重比显著降低(p<0.05);灌服重组菌rLpPG612-PPH-PF1-PR39组小鼠血液中白细胞、淋巴细胞数和淋巴细胞比率与对照组相比,虽有所增加,但差异不显著;灌服重组菌rLpPG612-PPH-PF1-PR39小鼠血清中IgG、IgM抗体水平均高于对照组小鼠,其中IgM抗体水平差异显著(p<0.05),肠黏液中sIgA抗体水平虽有升高,但变化不明显;灌服重组菌rLpPG612-PPH-PF1-PR39小鼠细胞因子TGF-β、TNF-α水平明显提高,细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-6水平下降;重组菌rLpPG612-PPH-PF1-PR39对小鼠感染产肠毒素大肠埃希氏菌和沙门氏菌具有一定的保护效应,保护率分别达到83.3%和66.7%。综上,本研究构建的重组菌rLpPG612-PPH-PF1-PR39具有一定的抑菌活性,能有效促进小鼠的生长性能,并提高机体的非特异性免疫功能,对致病菌感染具有一定的保护作用,研究结果为重组乳酸菌微生态制剂的研发与应用提供了依据。

引文