用于低分子量肝素精细结构分析的多维分离与多维检测技术

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• 论文作者：康经武 ; 张明瑜 ; 张倩倩 ; 展学强
• 年：2016
• 作者机构：生命有机与天然产物化学国家重点实验室中科院上海有机化学研究所;
• 论文关键词：低分子量肝素 ; 多维分离 ; 多维检测 ; 多糖的结构分析
• 会议召开时间：2016-07-01
• 会议录名称：中国化学会第30届学术年会摘要集-第二十三分会：复杂样品分离分析
• 语种：中文
• 分类号：R917;O652
• 学会代码：ZGHY
• 会议名称：中国化学会第30届学术年会-第二十三分会 ; 复杂样品分离分析
• 会议地点：中国辽宁大连
• 主办单位：中国化学会
• 学会名称：中国化学会
• 页数：1
• 文件大小：127k
• 原文格式：D
• 会议级别：全国

摘要

低分子量肝素LMWHs在临床上主要用于抗凝血、预防静脉血栓、心绞痛和其他血液高凝状态的疾病,近年来,还发现其具有抑制平滑肌细胞增殖、抗炎抗肿瘤活性。肝素结构极其复杂,这为研究其结构与功能关系的带来很大挑战。我们提出一种新的全面分析低分子量肝素精细结构的策略:即用超高效体积排阻色谱/飞行时间质谱(UPSEC/Q-TOF-MS)对完整的LMWHs糖链结构进行从上而下(Top-down)的轮廓分析(profiling),用毛细管区带电泳对构成糖链的模块(building blocks)进行自下而上的(bottom-up)的定量分析。用抗凝血酶Ⅲ亲和色谱依据活性将所有的组分按亲和作用的强弱分为弱,中,强三个组分。这些分离技术从多方面提供互补的结构信息,获得构成低分子量肝素糖链结构类型、组份分布、精细以及亲和活性与硫酸化的关系。用UPSEC将LMWHs的所有成份按分子量大小分为24个馏分,这不仅可以获得糖链链长分布数据,也大大简化了质谱图的复杂程度。通过在线连接的Q-TOF-MS获得每一馏分中包含的各异构体的高分辨质谱图。用去卷积质谱数据分析法就可以从质谱数据中获得糖链的结构信息,如构成糖链的building blocks、糖链的硫酸化和氨基乙酰化程度等。使用这一技术一共可以鉴定出包括具有1,6-成环结构、非还原端为饱和艾杜糖醛酸,以及糖链数为奇数的70多种寡糖链结构。而对糖链的building blocks进行定量分析则需要将低分子量肝素用肝素水解酶(Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ)混合酶溶液彻底水解,然后用建立的毛细管电泳电泳方法对包括10个二糖,1个三糖,2个四糖,特别重要的是4个带有1,6-成环结构的寡糖。对五糖序列残留片段进行分离,建立了定量测定五糖序列结构含量的方法。我们建立了依据硫酸化寡糖的电泳淌度与其电荷-质量比呈线性关系的原理,用于电泳图中归属那些无法获得标准品的特殊硫酸化寡糖的方法,保证了定量分析的准确性。

引文

[1]Q.Zhang,X.Chen,Z.Zhu,X.Zhan,Y.Wu,L.Song,J.Kang,Anal.Chem.,2013,85,1819-1827.
    [2]张倩倩,康经武,色谱,2013,684-690.