15株暴发流行全耐药肺炎克雷伯菌的耐药基因分布特点和流行病学研究

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• 论文作者：张亚培 ; 李梅梅 ; 尉骁 ; 孙瑶 ; 周铁丽
• 年：2014
• 作者机构：温州医科大学附属第一医院医学检验中心;
• 论文关键词：肺炎克雷伯菌 ; KPC-2 ; rmtB ; PDR ; ST11 ; 暴发流行
• 会议召开时间：2014-09-13
• 会议录名称：纪念中国微生物学会临床微生物学专业委员会成立五周年-第五届中国临床微生物学大会暨台湾海峡两岸微生物学与免疫学论坛论文汇编
• 语种：中文
• 分类号：R440
• 学会代码：WSWZ
• 会议名称：纪念中国微生物学会临床微生物学专业委员会成立五周年-第五届中国临床微生物学大会暨台湾海峡两岸微生物学与免疫学论坛
• 会议地点：中国浙江宁波
• 主办单位：中国微生物学会临床微生物学专业委员会、医学参考报社、宁波大学医学院附属医院
• 学会名称：中国微生物学会临床微生物学专业委员会
• 页数：1
• 文件大小：61k
• 原文格式：O
• 会议级别：全国

摘要

目的分析我院短时间内集中病区暴发流行的15株全耐药(pan-drug-resistant,PDR)肺炎克雷伯(K1ebsiella.pneumoniae,KPn)的耐药基因分布特点和流行病学特点,为控制此次暴发流行的继续蔓延和预防类似感染的再次发生提供依据。方法收集临床分离的PDR KPn 15株,整理分析病人临床病例资料,采用琼脂稀释法测定临床常见药物的MIC值。PCR法检测超广谱β-内酰胺酶基因(ESBL,s)、AmpC酶基因、质粒介导的喹诺酮耐药基因(PMQR)、碳青霉烯酶类耐药基因、16S rRNA甲基化酶基因和7个管家基因。提取菌株质粒对主要的耐药基因进行Southern blot并进行接合转移试验来了解耐药基因的水平传播特点。超声破碎法获得外膜蛋白进行SDS-PAGE,扩增0MPK35和0MPK36的结构基因并对外膜蛋白序列进行预测来了解菌株外膜蛋白的改变。采用脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)和多位点序列分型(Multilocus sequence typing,MLST)方法对PDR菌株进行同源性和分子流行病学分析。结果临床病例整理分析发现感染PDR KPn的病人除1人外都在相同的病区居住过,且都有相似的基础疾病和侵入性治疗经过。药敏结果显示试验菌株对三、四代头孢菌素,氟喹诺酮类药物,碳青霉烯类药物、氨基糖苷类药物,β-内酰胺类/β-内酰胺酶抑制剂复合物等各类临床药物都表现出高水平耐药。PCR检测及测序发现所有的菌株都携带有blaCTX-M-65、blaSHV-11、aac(6,)-ib-cr、oqxA、oqxB、blaKPC-2、blarmtB,个别菌株还同时携带有其他耐药基因。Southern blot定位显示blaKPC、rmtB和blaCTX-M-9都位于~54.2 kb大小的质粒上,接合转移试验也验证了耐药基因的水平传播性。SDS-PAGE和预测蛋白序列分析显示所有菌株0MPK36高度保守序列PEFXG的相邻位置都插入了甘氨酸和天冬氨酸,每株菌还存在数量不等的氨基酸残基改变。PFGE显示所有菌株都为同一克隆型,MLST也显示14株菌归属于为ST11型,1株是新的ST型ST1384。PDR菌株是在ST11背景下产生的。结论多种耐药决定因素编码的各类酶、外排泵的改变以及外膜蛋白对抗菌药物渗透性的改变等多种因素相互协同和促进造成了全耐药表型的出现。耐药基因的水平传播性、菌株间高度的同源性和流行传播性都应引起我们的高度重视。

引文