铜绿假单胞菌耐药基因监测液态芯片的研制
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摘要
目的建立以液态芯片为检测手段的快速、高通量细菌耐药基因监测技术平台,探索建立能够常规应用于临床并解决现行临床表型测定局限性的分子生物学技术。方法针对铜绿假单胞菌中常见的OPRD2、TEM、OXA10、AAC3、AAC6、VIM、VEB、IMP共8个耐药基因序列进行分析,同时参考临床采集的耐药菌的这8个耐药基因的测序结果,依次对这8个耐药基因设计多重PCR扩增引物和序列特异的核酸探针,选取临床鉴定的含单耐药基因的耐药菌株作为阳性参比品进行检测工艺优化,进行铜绿假单胞菌多重耐药基因悬浮阵列检测平台的研发。结果建立了铜绿假单胞菌多重耐药基因悬浮阵列检测平台;完成铜绿假单胞菌液态芯片试剂盒的制备及检测体系的优化和确定,并对其特异性、灵敏度和重复性进行分析,达到临床应用水平。结论此检测平台是将一种多重扩增技术和目前最先进实用的芯片技术-悬浮阵列技术相结合的方法,在国内外尚无报道。其特异性高、可组合筛查、检测通量高,检测平台成熟,能够应用于临床,具有其它检测平台所没有的优势,应用前景十分广阔。
引文

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