鸡传染性支气管炎病毒的培养以及单克隆抗体的制备

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• 论文作者：耿玥 ; 祁艳华 ; 聂守一 ; 赵军 ; 孙换平 ; 张改平 ; 周景明
• 年：2016
• 作者机构：郑州大学;
• 论文关键词：IBV ; 单克隆抗体 ; 间接ELISA
• 会议召开时间：2016-11-04
• 会议录名称：第十一届全国免疫学学术大会摘要汇编
• 英文会议录名称：Abstracts of 2016 CSI Congress on Immunology
• 语种：中文
• 分类号：S852.65
• 学会代码：IGMD
• 会议名称：第十一届全国免疫学学术大会
• 会议地点：中国安徽合肥
• 主办单位：中国免疫学会
• 学会名称：中国免疫学会
• 页数：2
• 文件大小：1297k
• 原文格式：D
• 会议级别：全国

摘要

背景:鸡传染性支气管炎(Infectious Bronchitis,IB)是传染性支气管炎病毒(Infectious Bronchitis Virus,IBV)引起的鸡的一种急性、高度接触性传染病,是严重危害养鸡业的重大传染病之一。IBV是禽类一种变异性很强的冠状病毒。IBV具有抗原性复杂、易发生点突变和基因重组、血清型众多及不同血清型毒株之间交叉保护力弱等特点,导致不断爆发和流行,且各处报道的病毒血清型鉴于地域的不同有一定差异。单克隆抗体具有相对稳定性、高度纯一性、可持续获得性、识别特异性等特点,对基础研究及诊断和防治具有重要意义。目的:IBV单抗能够与IBV特异性结合,再配合特定的显色系统可以建立诊断试剂条,为快速诊断试剂条奠定了基础。同时也对抗原变异、发病机制的研究及诊治具有重要的意义。方法与结果:鸡传染性支气管炎病毒的培养需要先使病毒适应鸡胚、再适应鸡胚原代细胞、最后适应传代细胞。本实验采用9-11日龄SPF鸡胚盲传IBV数代使病毒复壮,收集鸡胚尿囊液接种鸡胚肾细胞,传代培养至细胞出现CPE。收毒,采用差速离心法和蔗糖密度梯度离心法分离纯化病毒。取离心浓缩的病毒(50-100μg/只)加入PBS至200μL,再向其中加入等体积的弗氏佐剂,充分乳化后皮下多点免疫6-8周龄的雌性Balb/c小鼠,建立间接ELISA检测方法。用建立好的间接ELISA测定小鼠的血清抗体效价,待小鼠效价大于104后,用PEG融合法进行细胞融合,用HAT培养基培养。融合后利用间接ELISA方法对杂交瘤细胞及时筛选。阳性强的孔经有限稀释法亚克隆,杂交瘤细胞注入小鼠腹腔,产生腹水,提纯抗体鉴定。

引文