巴氏杀菌乳中细菌PMA-PCR活菌检测方法的建立

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• 论文作者：盖冬雪 ; 刘熙 ; 胡盼 ; 卢士英 ; 任洪林 ; 李岩松 ; 柳增善
• 年：2016
• 作者机构：人兽共患病教育部重点实验室/吉林大学动物医学学院;广泽乳业有限公司;
• 会议召开时间：2016-07-20
• 会议录名称：中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第五次学术研讨会论文集
• 语种：中文
• 分类号：TS252.7
• 学会代码：SYGW
• 会议名称：中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第五次学术研讨会
• 会议地点：中国内蒙古通辽
• 主办单位：中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会
• 学会名称：中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会
• 页数：2
• 文件大小：518k
• 原文格式：D
• 会议级别：全国

摘要

乳品因其营养物质丰富口感良好备受消费者亲睐,但近年来乳品安全事件不断被媒体曝光,乳品的质量与安全成为生产企业与消费者共同瞩目的焦点。微生物污染是造成乳品安全事件的主要因素之一,受微生物污染会导致产品变质、腐败、胀袋,严重者会引发食物中毒等严重事故。常规检测方法耗时长,不适用于企业生产加工过程中信息的及时反馈。因此,建立一种快速检测乳品中细菌活菌总数的检测方法对乳品生产加工企业十分必要。本实验首先从广泽乳业采集原料乳及巴氏杀菌乳样品约500份,分离样品中污染细菌,利用16S r DNA序列测序法及生化实验法进行鉴定,确定微生物污染菌谱。利用叠氮溴化丙锭(PMA)与q PCR技术结合,定量样品微生物中细菌活菌的16S r DNA,建立一种快速计数巴氏杀菌乳中细菌活菌总数检测方法。优化PMA处理条件,确定细菌死活筛选的最佳处理为PMA工作浓度15μg/m L,暗孵育时间10 min,曝光时间15 min。通过q PCR分析,建立细菌浓度对数与Ct值的标准曲线,最低检测限为103 CFU/m L。参照国标GB19645-2010,当巴氏杀菌乳中的细菌总数限量值为1×105 CFU/g(m L),对细菌浓度在1×105 CFU/m L时加标污染牛奶的Ct值进行分析,得到了巴氏杀菌乳中细菌数量超标的参考Ct值范围。结果显示:细菌浓度为1×105 CFU/m L的Ct值范围为27.24~30.85;对100份实际样品采取PMA-q PCR法与国标法同时进行检测,验证PMA-q PCR活菌检测方法的准确性。结果显示:该方法的检测时间在4 h左右,准确率高于90%,能够快速检测巴氏杀菌乳中细菌的活菌总数。

引文