弓形虫效应分子GRA15Ⅱ诱导巨噬细胞极化抗小鼠肝癌的研究
详细信息 查看官网全文
- 论文作者：李源玲 ; 蔡亦红 ; Faustina Poppoe ; 沈继龙
- 年：2016
- 作者机构：安徽病原生物学省级实验室,人兽共患病安徽省重点实验室(安徽医科大学),安徽医科大学病原生物学教研室;安徽医科大学公共卫生学院检验教研室;
- 论文关键词：弓形虫 ; 致密颗粒蛋白GRA15 ; 肝细胞性肝癌 ; TAMs
- 会议召开时间：2016-08-08
- 会议录名称：中国动物学会寄生虫学专业委员会第十届全国寄生虫学青年工作者学术研讨会论文摘要集
- 英文会议录名称：The Abstracts of the Tenth Symposium for Yong Scientists of China Society of Parasitology
- 语种：中文
- 分类号：R735.7;R730.51
- 学会代码：JISC
- 会议名称：中国动物学会寄生虫学专业委员会第十届全国寄生虫学青年工作者学术研讨会
- 会议地点：中国四川成都
- 主办单位：中国动物学会寄生虫学专业青年委员会
- 学会名称：中国动物学会寄生虫学专业委员会
- 页数：1
- 文件大小：606k
- 原文格式：D
- 会议级别：全国
摘要
目的:探讨弓形虫效应分子GRA15_(Ⅱ)诱导的caMφ逆转小鼠肝癌微环境中的TAMs从M2向M1极化,抑制肿瘤增殖、侵袭及转移,旨在为肿瘤免疫治疗提供新思路和新策略。方法:从Ⅱ型弓形虫PRU株中提取总RNA,扩增多态性GRA15_(Ⅱ)编码基因,构建重组质粒pegfp-gra15Ⅱ。体外将质粒亚克隆入慢病毒载体并感染小鼠细胞系RAW264.7,使之诱导为ca Mφ。体外分别将Lv-gra15Ⅱ-Mφ(A组),空白病毒载体Lv-Mφ(B组)和未感染Mφ(C组)与小鼠肝癌细胞系Hepa1-6进行transwell共培养,观察上述三组Hepa1-6的增殖、迁移和侵袭能力,以及MMP-9和MMP-2表达。体内实验,取75只SPF级4-5w龄雌性C57/BL6小鼠,右腹股沟皮下成瘤。3d后随机分为3组,每组25只。A组为在皮下注射成瘤后3d、5d分别尾静脉给予重悬于150μl生理盐水的2×106 Lv-gra15Ⅱ-Mφ;B组给予重悬于150μl生理盐水的2×106 Lv-Mφ;C组给予150μl生理盐水。在皮下注射成瘤10d后无痛处死小鼠。剥离肿瘤组织,观察实体瘤体积;免疫组化检测肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)浸润和免疫抑制因子及血管生成相关因子的表达;瘤体q RT-PCR检测iN OS、TGF-β、VEGF、IL-6和IL-10表达;ELISA检测IL-6水平的变化。结果:1.GRA15_(Ⅱ)可驱动RAW264.7向ca Mφ方向极化。FCM、细胞培养上清和q RT-PCR检测均显示Lv-gra15Ⅱ-Mφ相比于Lv-Mφ和Mφ,其PD-L1,CD80,NO、TNF-α,IL-12p40和iN OS有显著升高(P<0.05)。2.体外共培养实验显示,Lv-gra15Ⅱ-Mφ可抑制小鼠肝癌细胞Hepa1-6迁移、侵袭,可下调其外基质相关蛋白的分泌,而对Hepa1-6凋亡无影响。q RT-PCR和蛋白水平检测均显示A组与B组和C组比较,MMP-9、MMP-2表达显著下调(P<0.05)。3.体内试验TAMs检测结果,Lv-gra15Ⅱ-Mφ可减轻TAMs浸润,并且使其向M1方向偏移,抑制肿瘤的增生。实体瘤免疫组化分析显示,A组TAMs浸润显著减少(P<0.05),IL-10,TGF-β及血管内皮生长因子(VEGF)表达下调,而MHC Ⅱ增加。q RT-PCR检测显示A组实体瘤中iN OS表达明显增加(P<0.05),而TGF-β、VEGF、IL-6和IL-10表达抑制。ELISA检测显示A组瘤体内的IL-6分泌下调(P<0.05)。结论:弓形虫效应分子GRA15_(Ⅱ)慢病毒感染RAW264.7,可驱动后者向caMφ极化,且GRA15_(Ⅱ)在宿主细胞内可稳定、持续表达。在肿瘤发生早期被动输入虫源性GRA15_(Ⅱ)驱动的ca Mφ可通过调节TAMs的浸润和偏移明显抑制肿瘤在体内的进展。GRA15_(Ⅱ)对宿主无明显毒副作用,具有深入研究的应用价值。
引文