一氧化氮诱导的奶牛乳腺上皮细胞损伤模型的建立

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• 论文作者：郭咏梅 ; 张博綦 ; 石惠宇 ; 闫素梅 ; 史彬林 ; 郭晓宇
• 年：2016
• 作者机构：内蒙古农业大学动物科学学院;
• 论文关键词：二乙烯三胺/一氧化氮聚合物 ; 氧化损伤 ; 乳腺上皮细胞 ; 奶牛
• 会议召开时间：2016-10-21
• 会议录名称：中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十二次动物营养学术研讨会论文集
• 语种：中文
• 分类号：S823
• 学会代码：ZGXJ
• 会议名称：中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十二次动物营养学术研讨会
• 会议地点：中国湖北武汉
• 主办单位：中国畜牧兽医学会动物营养学分会
• 学会名称：中国畜牧兽医学会
• 页数：1
• 文件大小：64k
• 原文格式：O
• 会议级别：全国

摘要

泌乳期间的奶牛由于代谢旺盛,往往会产生大量一氧化氮(NO),诱导发生氧化应激,进而对细胞产生毒害作用。奶牛乳腺上皮细胞(BMEC)发生氧化应激不仅会影响机体健康,还会因为氧化产物的积累导致乳品质降低。因此,建立可靠的氧化损伤模型是揭示氧化应激机制的重要措施之一,对改善奶牛健康及改进乳品质具有重要意义。本试验旨在探讨二乙烯三胺/一氧化氮聚合物(DETA/NO)诱导奶牛乳腺上皮细胞(BMEC)氧化应激的损伤条件,并建立适宜的氧化损伤模型。试验分为两部分。试验1采用单因子完全随机试验设计,将第三代贴壁生长的BMEC随机分为36个处理组,每组6个重复,处理组细胞培养基中分别添加0μmol/L、10μmol/L、30μmol/L、100μmol/L、500 mol/L、1 000μmol/L的DETA/NO,使之分别作用2 h、4 h、6 h、8 h、12 h和24 h。其中,0μmol/L为对照组。通过测定其对细胞存活率的影响,初步筛选DETA/NO适宜的处理时间。试验2采用单因子随机试验设计,将第三代贴壁生长的BMEC随机分为6个处理组,每组6个重复,每组细胞培养基中分别添加0μmol/L、10μmol/L、30μmol/L、100μmol/L、500μmol/L、1 000上mol/L的DETA/NO。其中,0μmol/L为对照组。DETA/NO处理时间以试验1筛选得出的时间为准,以抗氧化指标、炎症因子、NO浓度及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性为依据,进一步筛选出适宜的DETA/NO处理浓度,建立BMEC氧化损伤模型。结果表明:1)DETA/NO作用细胞6 h后,即可对细胞造成氧化损伤,除500μmol/L、1 000μmol/L外,其他浓度处理组的细胞数量波动较小。其中,1 000μmol/L的DETA/NO处理细胞6 h后,细胞存活率降低为74.27%,符合细胞存活率的筛选要求(70%~80%),并且未对细胞造成不可逆的损伤,有利于氧化损伤建模进行后续试验,并且可以在较短时间内观察到试验结果。2)各处理组的超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性随DETA/NO浓度增加均降低,其中以1 000μmol/L处理组最低,显著低于其他各处理组(P<0.05);然而,iNOS活性、NO、白介素-1、白介素-6、肿瘤坏死因子-α、丙二醛含量随DETA/NO浓度增加呈现相反的变化规律,即显著升高(P<0.05),其中1 000μmol/L最高,这些结果表明BMEC产生了明显的氧化应激。综上所述,1 000μmol/L的DETA/NO处理细胞6 h,可构建理想的BMEC氧化应激模型。

引文