中国市场上促红细胞生成素制剂的电泳行为研究
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摘要
研究目的:自上世纪90年代末起,全国陆续有多家科研单位先后研制出EPO,从而使EPO的国产化程度大大提高。国产EPO价格低廉,购买渠道丰富,但由于生产途径的多样化,可能存在不同于国际标准中列出的各类EPO的电泳行为。本研究应用WADA在2014年最新版的EPO技术文件的检测要求,对中国市面上各类EPO制剂进行统一的对比实验,同时,募集准专业运动员志愿者进行耐力型长距离运动,配以EPO受试试验,对不同EPO制剂此种情况下的电泳行为进行系统的分析。研究方法:本研究首先采集了准专业运动员进行了20公里长跑的阴性尿样,针对耐力运动后的富蛋白尿进行实验条件的优化,排除以往反兴奋剂EPO检测中富蛋白尿回收率低、蛋白质相互作用导致EPO蛋白降解并导致电泳条带漂移等因素对检测结果的干扰,明确检测流程采用的样品前处理条件和电泳分离条件。同时应用WADA最新版技术文件要求优化后的实验条件,对这些EPO制剂进行统一的对比实验,从而确认电泳行为存在异常,找出明显不同于WADA判定标准的制剂。本研究通过伦理委员会评审批准,募集准专业运动员进行该EPO制剂的人体受试实验,并要求志愿者在给药后进行限时长跑运动。此后,收集受试志愿者一周的尿样,并应用本研究优化的实验条件统一进行检测。研究结果:国产制剂中宁红欣的条带与其它制剂存在明显差异,其条带分布较宽,且在内源性条带所在位置存在部分前沿分布。而宁红欣的受试试验结果显示,该药物单次皮下注射后,条带均呈现合并条带现象,志愿者的样品的条带的下沿随时间从较高处变化到与内源性条带相同的位置,全部受试尿样的电泳检测结果均可见条带,且在第五天晨尿之前全部可按技术文件明确判定为阳性,第7天晨尿条带基本显示为阴性,但增加曝光时间后,在阳性区域依然可识别存在条带拖尾的印迹。由此可见宁红欣在体内代谢后的电泳行为与此前的针剂标准品实验基本一致,而抑制内源性条带的现象也符合文献报道。研究结论:本研究将SAR-PAGE辅助确证方法,优化作为可进行大批量操作的初筛检测方法。本研究筛选的国产制剂中,发现与WADA技术文件描述不同的EPO制剂宁红欣,并组织了人体受试实验,明确其单次注射后的检测窗口期为5天。该成果目前已经投入常规检测工作应用,完成了包括田径世锦赛,一青会等赛事样品在内将近1200例的常规检测,并顺利通过全球首次的WADA的EPO考试、并检出阳性样品一例。
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