WADA禁用生长激素释放肽和生长激素促分泌素HPLC-MS/MS方法的检测
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- 论文作者：申利 ; 张力思 ; 杨辛兰 ; 河春姬 ; 周鑫淼 ; 徐友宣 ; 闫宽
- 年：2016
- 作者机构：国家体育总局反兴奋剂中心;北京体育大学;
- 论文关键词：禁用物质 ; 固相提取 ; 小肽 ; 液相色谱柱-串联质谱法
- 会议召开时间：2016-10-21
- 会议录名称：第四届（2016）全国运动生理与生物化学学术会议——运动·体质·健康论文摘要汇编
- 语种：中文
- 分类号：R872
- 学会代码：ZGTK
- 会议名称：第四届（2016）全国运动生理与生物化学学术会议——运动·体质·健康
- 会议地点：中国江苏无锡
- 主办单位：中国体育科学学会运动生理与生物化学分会
- 学会名称：中国体育科学学会
- 页数：2
- 文件大小：97k
- 原文格式：O
- 会议级别：全国
摘要
研究目的:生长激素释放肽和生长激素促分泌素等物质刺激人体自身生长激素的分泌,使之成为运动员药物滥用的新热点。WADA陆续将其列入禁用清单,并要求认可实验室从2016年3月开始开展此类物质的检测工作。为了满足WADA实验室国际标准和技术文件要求,保持实验室认可资格,建立此类物质的检测方法极为必要和紧迫。选取GHRP-1,GHRP-2,GHRP-4,GHRP-5,GHRP-6,Alexamorelin,Hexarelin,Anamorelin和Ipamorelin为研究对象,建立了HPLC-MS/MS检测方法并应用于常规检测。研究方法:使用1290/6470液相色谱质谱仪和Zorbax 300SB-C18色谱柱进行定性分析,含0.2%甲酸的水/乙腈体系进行梯度洗脱,洗脱剃度为:0-1.5min:90%A,1.5-2.0min:80%A,2.0-8.0 min:60%A,8.0-8.1min:10%A,8.1~10min:10%,流速为0.25mL/min质谱检测采用动态多反应离子检测。使用Oasis~WCX固相提取小柱提取,1~mL甲醇活化,1mL纯水平衡,1.5mL尿样加入10μL IS溶液,离心钟后取1mL加入小柱,依次用1~mL 5%NH_4OH和1m 20%CH_3CN清洗后,1mL含2%甲酸的水/乙腈(1/3)液洗脱,35℃氮气流下吹干,100μL初始流动相复溶后进样。研究结果:检测物的锥孔电压分布在90-180V,碰撞电压分布在10-40V。检测限:GHRP-1为1ng/mL,anamorelin为0.01ng/mL,其余物质均为0.1ng/mL。使用OasisWCX固相提取柱进行尿样前处理,回收率分布在40-76%之间,日内精密度和日间精密度均小于15%,尿中基质无明显干扰。尿样直接上样分析发现室温、冷藏长期储存和反复冻融对有些物质有明显影响。研究结论:建立了使用我实验室现有仪器设备对九种生长激素释放肽和生长激素促分泌素的检测方法,尿样经Oasis WCX小柱进行前处理后,进行HPLC-MS/MS分析。方法简单,特异性、灵敏度均可满足WADA实验室国际标准和技术文件要求。现己应用于我实验室的常规检测。
引文