液相色谱-串联质谱法定性检测人尿中7种选择性雄激素受体调节剂
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摘要
研究目的:由于选择性雄激素受体调节剂(SARMs)所具有蛋白同化作用,而没有类固醇激素所带来的副作用,所以这类药物很有可能被运动员作为类固醇激素的替代药物,用来提升自身的蛋白转化,从而提升肌肉力量,提升比赛成绩。这将严重违背公平竞赛的原则,保证中国代表团或中国运动员出国比赛不出现兴奋剂事件,是反兴奋剂中心的重要职责之一。鉴于目前国际上部分实验室已经开展此类药物的研究,我实验室亟需建立该药物的研究方法,保证中国运动员不出现此类药物的滥用。本论文以选择性雄激素受体调节剂为研究对象,采用高效液相色谱串联质谱联用仪(LC-MS/MS)探索、建立人尿中择性雄激素受体调节剂的检测方法。研究方法:取1ml尿液加入10μL×5 ppm的甲睾作为内标,50μL葡萄糖醛酸甙酶,0.5 mL磷酸盐缓冲盐,震荡混匀,于55℃水浴1 h,加0.5 mL碱性缓冲盐,加4 mL甲基叔丁基醚,萃取,保留有机相,常温氮气流吹干,用初始流动相溶解定容至100μL,进样分析。液相条件:Phenomenox C18色谱柱(2.1mm×50mm×2.6μm);柱温40℃;流动相采用含0.1%甲酸胺的水溶液(A),和含0.1%甲酸胺的乙腈溶液(B)进行梯度洗脱;洗脱程序:0 min,90%A:10%B,15 min,10%A:90%B;流速0.25mL/min,运行15min,平衡5 min。API 5500Q-MS质谱条件:高真空:0.5×10-5torr;扫描方式schedule MRM;气帘气:30psi;碰撞气:中等(Medium);离子化电压:-4000v。研究结果:建立了7种选择性雄激素受体调节剂药物的常规筛查方法,并对该检测方法进行了方法验证工作。7种药物检出限均小于或等于2ng/mL,回收率均高于65%,在高中低三个浓度(5 ng/mL、20ng/mL、100ng/mL)日内及日间精密度均低于16%,满足世界反兴奋剂机构(WADA)技术文件中低于20%的要求。研究结论:选择性雄激素受体调节剂作为一类新的、潜在的具有蛋白同化作用的药物,且由于其蛋白同化作用可能被运动员滥用。对于如何监控并保证运动员不使用该类药物,具有重要的现实意义。本研究建立了人尿中筛查7种选择性雄激素受体调节剂药物的前处理方法和液相色谱串联质谱方法,对该方法进行了方法验证工作,满足世界反兴奋剂机构技术文件要求。
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