Viperin抑制狂犬病病毒机理的研究
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- 论文作者：唐海波 ; 韦显凯 ; 路专灵 ; 钟一治 ; 彭可可 ; 欧阳伶宣 ; 蒋元 ; 徐素萍 ; 张扬祖 ; 刘宇明 ; 邓朝谦 ; 李晓宁 ; 罗廷荣
- 年：2016
- 作者机构：广西大学动物科学技术学院动物传染病实验室;
- 论文关键词：狂犬病病毒 ; Viperin ; TLR3 ; TLR4
- 会议召开时间：2016-09-18
- 会议录名称：第六届中国兽药大会论文集
- 英文会议录名称：Proceedings of 2016 the 6th China Congress of Veterinary Medicine
- 语种：中文
- 分类号：S852.65
- 学会代码：ZGXJ
- 会议名称：第六届中国兽药大会
- 会议地点：中国四川成都
- 主办单位：中国兽医药品监察所、中国兽药协会
- 学会名称：中国畜牧兽医学会
- 页数：2
- 文件大小：142k
- 原文格式：O
- 会议级别：全国
摘要
Viperin是一种干扰素诱导蛋白,可通过完全不同的机制对多种病毒发挥抗病毒活性。我们的研究发现,狂犬病病毒在巨噬细胞RAW264.7中生长缓慢,病毒滴度显著地低于易感细胞(如NA细胞),viperin表达微弱或不表达,但感染巨噬细胞时viperin被显著诱导表达。本研究为了探索抗病毒蛋白viperin的表达是否抑制狂犬病病毒的复制,我们构建了viperin的真核表达载体,通过瞬时转染BSR-T7细胞,过表达viperin,证实了过表达viperin能抑制狂犬病病毒rRC-HL的复制,在一定范围内狂犬病病毒N、P和M蛋白在细胞中的表达量明显被抑制,狂犬病病毒滴度显著降低。通过筛选稳定表达viperin的BHK-21细胞系,感染狂犬病病毒,发现稳定表达viperin的BHK-21细胞系对狂犬病病毒rRC-HL株的抑制效果更加明显,显著抑制了病毒蛋白的合成。同样稳定表达viperin的BHK-21细胞系显著抑制广西分离强毒Ⅰ群和Ⅲ群代表株GX01和GXN119。为了探索viperin抑制狂犬病病毒复制的机理,本实验就viperin对脂筏的重要组成成分胆固醇和鞘磷脂的生物学作用进行探索。首先在BSR-T7细胞中过表达viperin,检测细胞中胆固醇和鞘磷脂变化情况。结果显示,过表达viperin能够降低细胞中胆固醇和鞘磷脂的含量,推测viperin可能通过破坏胆固醇和鞘磷脂以抑制狂犬病病毒释放。同时添加分别抑制胆固醇和鞘磷脂的药物MβCD和Myroicin,发现破坏细胞的胆固醇和鞘磷脂对狂犬病病毒的吸附与穿入无影响,但对狂犬病病毒的出芽与释放有抑制作用,证实了破坏细胞的胆固醇和鞘磷脂是viperin抑制狂犬病病毒复制的重要途径之一。本研究使用流式细胞术证明了巨噬细胞感染狂犬病病毒后,显著上调TLR4的表达,说明狂犬病病毒激活了TLR4;然而再用灭活的狂犬病病毒孵育巨噬细胞,发现保留了基本自然特性的狂犬病病毒囊膜糖蛋白能够诱导viperin的表达。进一步用TLR4的特异性抑制剂(TAK-242)阻断TLR4信号的传导,显示viperin的表达量显著减少,说明TLR4参与了识别狂犬病病毒并诱导viperin表达。
引文