埃博拉疫苗和喷雾佐剂的研制
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摘要
目的:研制出以滴鼻为给药方式的埃博拉病毒新型亚单位疫苗和免疫佐剂。方法:1.研制埃博拉病毒疫苗。构建表达载体p ZE400转化进入感受态大肠杆菌BL21 DE3表达菌株,进行埃博拉GP蛋白的表达、纯化、透析复性及免疫效果评价。2.研制喷雾佐剂。构建表达载体p CTA转化进入感受态大肠杆菌BL21 DE3表达菌株,进行具有霍乱弧菌毒素A亚基和金黄色葡萄球菌特点的蛋白表达、纯化及对表达蛋白进行Western blotting和细胞膜靶向性分析。3.埃博拉病毒疫苗与喷雾佐剂配伍免疫效果评价。将石蟹猴随机分组,保证每组内为2雌1雄,分别编号为A1,A2,A3;B1,B2,B3。A组为实验组,B组为对照组。对A组实验动物施以喷雾佐剂+埃博拉病毒疫苗(1:1/m:m)混合液体滴鼻实验,剂量为200ul,蛋白总量为0.1mg。对B组实验动物施以喷雾佐剂+PBS相同剂量的免疫。免疫时间分别为第1天,第15天。每周对猴子采血一次,分别为第一天(免疫前),第8天。第14天(二次免疫前),第21天。获得的猴子血清56℃灭活30分钟进行中和实验。结果:研制的埃博拉病毒疫苗是糖蛋白的一段,能够使机体产生中和抗体。研制的喷雾佐剂有良好的细胞膜靶向性,能够有效通过粘膜进入生物机体,并能使机体产生中和抗体,可作为免疫佐剂用于生物制品的制备。结论:使用研制的埃博拉疫苗结合新型喷雾佐剂以滴鼻为给药方式进行石蟹猴免疫已取得初步成果。具有安全性高、适应人群广泛、有效性好、接种方便等方面的优势。
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