通过转座子插入突变寻找宿主菌中影响整合酶表达水平的因素
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- 论文作者：魏取好 ; 胡庆丰 ; 林晓伟 ; 李万翔 ; 吕火烊
- 年：2015
- 作者机构：上海市奉贤区中心医院检验科;浙江省人民医院检验中心;
- 论文关键词：整合子 ; 整合酶 ; 耐药性 ; 转座子
- 会议召开时间：2015-09-03
- 会议录名称：第六届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛论文汇编
- 语种：中文
- 分类号：R440
- 学会代码：WSWZ
- 会议名称：第六届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛
- 会议地点：中国湖南长沙
- 主办单位：中国微生物学会临床微生物学专业委员会、医学参考报社、宁波大学医学院附属医院
- 学会名称：中国微生物学会临床微生物学专业委员会
- 页数：1
- 文件大小：38k
- 原文格式：O
- 会议级别：全国
摘要
目的整合子在细菌耐药性产生和播散中发挥重要作用,但其具体的调控机制还不明了,本研究通过转座子插入突变寻找宿主细菌中影响整合酶表达水平的因素。方法在大肠埃希菌JM109中建立转座子随机插入突变文库,用链霉素耐药基因aadA2替代整合酶基因intI1,用琼脂稀释法筛选耐药性发生变化的突变株,将MIC值发生明显变化的细菌,抽提RNA,经逆转录后运用实时定量PCR检测报告基因aadA2的相对表达水平,通过反向PCR并经测序分析,以确定转座子插入突变的基因。结果获得库容量大于7000的转座子随机插入突变文库,可基本覆盖大肠埃希菌的所有读码框。通过药物敏感试验在JM109转座子随机插入突变文库中寻找宿主细菌中影响整合酶表达水平的因素,共筛查了4000株细菌,共找到3个插入突变基因可使报告基因aadA2转录水平,即整合酶基因转录水平增高:过氧化氢酶/过氧化物酶HPI(I)基因、磷酸烯醇丙酮酸羧激酶(PPC)基因、ATP依赖的蛋白酶ATP结合亚单位(clpx)基因。结论本研究中发现的3个插入灭活基因与整合酶的表达水平相关,该3个基因均与细菌的代谢有关,但其具体机制还有待进一步研究,本研究结果为进一步研究整合子捕获与表达耐药性基因盒调控机制提供新的线索。
引文