芸薹黄化病毒三种基因型的生物学特性比较研究
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摘要
芸薹黄化病毒(Brassica yellows virus,BrYV)是一种侵染十字花科作物的马铃薯卷叶病毒属的病毒,该病毒在我国的发生分布比较广泛,自然条件下由蚜虫以持久循回非增殖的方式传播。病毒基因组5′端的序列差异比较大,根据其5′端序列特点可分为A、B、C三种基因型。本实验室已获得BrYV三种基因型的侵染性cDNA克隆,能够通过农杆菌浸润接种的方法系统侵染本生烟。马铃薯卷叶病毒属多个成员P0被鉴定具有RNA沉默抑制活性,由于各个P0蛋白之间的氨基酸序列差异比较大,表现出来的抑制子活性强弱也存在差异。本实验室前期的研究工作中发现p0~(BrA)是一个很强的基因沉默抑制子,不仅能够引起局部沉默,在接种GFP转基因本生烟16c上能够抑制由单链GFP所诱发的系统沉默。BrYV三种基因型P0的氨基酸序列同源性为86.7%~90.8%。通过将各P0与单链GFP共注射实验表明,BrYlV三种基因型P0都具有很强的抑制局部沉默和抑制系统沉默的能力。P0除了具有抑制RNA沉默能力以外还能够在本生烟叶片上引起细胞坏死反应。通过在本生烟叶片上瞬时表达P0比较由其产生的坏死症状发现,p0~(BrB)和p0~(BrC)比p0~(BrA)要延迟坏死症状的出现。并且发现将P0~(BrA)第228位的氨基酸F突变为L后不影响其抑制子功能,但是能够延迟坏死症状的出现。马铃薯卷叶病毒(PLRV)能够与豌豆耳突病毒2(PEMV 2)发生协生互作,我们的研究结果表明BrYV三种基因型分别与PEMV 2复合侵染本生烟同样能够发生协生互作,将BrYV和PEMV 2混合接种本生烟2周以后能够在上部叶片观察到叶片扭曲和坏死的症状,检测结果表明在PEMV 2的辅助下BrYV的积累量增加。通过比较发现BrYV三种基因型P0都是很强的基因沉默抑制子,但是,在本生烟上产生的坏死症状存在差异,并且找到一些影响症状的关键氨基酸位点,为进一步研究病毒致病性的分子机理提供了基础。
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