亮氨酸和异亮氨酸调控奶山羊的胰腺外分泌功能的分子机制
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摘要
本试验旨在通过体外组织孵育技术探索亮氨酸和异亮氨酸调控奶山羊胰腺外分泌功能的分子机制。选取一只周岁龄健康关中奶山羊母羊,迅速屠宰并切取胰腺组织,置于冰的生理盐水(0.9%NaCl)中,立即送往实验室,胰腺组织经清洗、切块、称重后置于含3 mL KRB溶液的培养瓶里,培养瓶放置在细胞培养箱中进行孵育;孵育结束后,采集缓冲液并冷冻保存,用于测定胰腺组织酶的释放量;胰腺组织冷冻用于测定组织内酶活及mRNA丰度和活性、mTOR信号通路因子磷酸化程度。亮氨酸及异亮氨酸处理水平均为0、2.62 mg/mL、5.24 mg/mL和10.48 mg/mL,孵育时间为180 min,每个处理3个重复。结果显示,亮氨酸和异亮氨酸均可显著提高a-淀粉酶的组织浓度、缓冲液释放浓度和总浓度(U/g)以及胰蛋白酶和糜蛋白酶总浓度(U/g)(P<0.05);脂肪酶(U/g)不受异亮氨酸和异亮氨酸影响(P>0.05)。亮氨酸和异亮氨酸均显著提高a-淀粉酶mRNA表达(P<0.05),且高水平添加组(5.24 mg和10.48 mg)效果最为显著;亮氨酸促进胰蛋白酶和糜蛋白酶mRNA表达(P<0.05),对脂肪酶无影响(P>0.05);异亮氨酸对胰蛋白酶、糜蛋白酶和脂肪酶mRNA表达均有所提高,但差异不显著(P>0.05)。通过对奶山羊胰腺4EBP1的三种亚型(α、β和γ)磷酸化程度进行检测可知,亮氨酸和异亮氨酸均可显著提高γ型的表达,即亮氨酸可促进4EBP1的磷酸化(P<0.05);亮氨酸和异亮氨酸显著降低eEF2磷酸化水平(P<0.05);亮氨酸提高S6K1磷酸化水平(P<0.05),而异亮氨酸对S6K1磷酸化水平无影响(P>0.05)。综合以上结果,亮氨酸和异亮氨酸可通过调节胰腺酶mRNA表达和mTOR途径相关因子磷酸化水平来调控胰腺外分泌功能。
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