草鱼类泛素化E2结合酶UBC9的克隆表达及纯化

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• 论文作者：喻飞 ; 王浩 ; 吕利群
• 年：2016
• 作者机构：国家水生动物病原库农业部淡水种质资源重点实验室上海海洋大学水产与生命学院;
• 论文关键词：草鱼 ; 类泛素化 ; UBC9 ; 蛋白纯化
• 会议召开时间：2016-11-02
• 会议录名称：2016年中国水产学会学术年会论文摘要集
• 语种：中文
• 分类号：S917.4
• 学会代码：OGSB
• 会议名称：2016年中国水产学会学术年会
• 会议地点：中国四川成都
• 主办单位：中国水产学会、四川省水产学会
• 学会名称：中国水产学会
• 页数：1
• 文件大小：538k
• 原文格式：D
• 会议级别：全国

摘要

类泛素化(Small ubiquitin-related modifier,SUMO)是蛋白翻译后修饰的重要形式之一,E2结合酶UBC9在蛋白类泛素化过程中起到重要枢纽作用。本文主要目的为研究草鱼UBC9(Grass carp ubiquitin-conjugating enzyme,GcUBC9)蛋白的原核表达和建立UBC9的纯化方法。首先克隆基因GcUBC9的cDNA全长,得到477 bp的开放阅读框(Open reading frame,ORF),其编码158个氨基酸,对其同源性分析发现其与斑马鱼的亲缘关系最近;构建原核表达载体p GEX-4T-3-GcUBC9,诱导表达谷胱甘肽转移酶(GST)与GcUBC9的融合蛋白GST-GcUBC9,分析其表达及其可溶性;纯化方法选用AKTAprime Plus标签蛋白纯化系统和基于GST标签亲和层析实验室普通方法;用纯化的融合蛋白GST-GcUBC9制备鼠源多克隆抗体。结果表明,融合蛋白GST-GcUBC9成功表达,可溶;纯化蛋白纯度较高,两种方法蛋白得率比为7.8;成功制备高效价鼠源多克隆抗体。

引文