重组表达3G蛋白狂犬病病毒株的构建及重组病毒相关特性研究
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- 论文作者：刘澜 ; 李士成 ; 陈小云 ; 朱万光 ; 康凯
- 年：2016
- 作者机构：山东华宏生物工程有限公司;中国兽医药品监察所;
- 论文关键词：狂犬病病毒 ; 3G ; 感染性克隆 ; 重组病毒 ; 特性研究
- 会议召开时间：2016-09-18
- 会议录名称：第六届中国兽药大会论文集
- 英文会议录名称：Proceedings of 2016 the 6th China Congress of Veterinary Medicine
- 语种：中文
- 分类号：S852.65
- 学会代码：ZGXJ
- 会议名称：第六届中国兽药大会
- 会议地点：中国四川成都
- 主办单位：中国兽医药品监察所、中国兽药协会
- 学会名称：中国畜牧兽医学会
- 页数：2
- 文件大小：110k
- 原文格式：O
- 会议级别：全国
摘要
根据狂犬病病毒SAD Bern株的全基因组序列(GenBank No.EF206720)与软件分析,将病毒基因组分为8个片段,构建到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,获得感染性克隆pcDNA-SAD。同时,基因合成时在G蛋白和L蛋白基因之间引入BsiW Ⅰ和Nhe Ⅰ酶切位点,以插入2个串联的狂犬病病毒G蛋白基因,获得携带3个G蛋白基因的重组质粒pcDNA-SAD-3G。利用脂质体转染法将纯化的质粒pcDNA-SAD-3G及辅助质粒pcDNANP、pcDNA-P、pcDNA-L和pcDNA-G共转染BSR细胞、在BHK-21细胞上盲传,经RTPCR、IFA鉴定重组病毒。结果表明,本研究成功获得表达3个狂犬病病毒G蛋白的重组病毒RV-r3G,重组病毒RV-r3G的生长特性与亲本rSAD相比无明显差异,并且额外增加2个G基因同样不影响重组病毒的生长性能,重组病毒RV-r3G在感染细胞中表达G蛋白的总量显著高于亲本株rSAD,RV-r3G体外嗜神经性比野生型高,本研究为进一步研发安全、有效的狂犬病毒疫苗候选毒株奠定基础。
引文