家蚕小热激蛋白sHsp27.4基因的克隆分析及其原核表达

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• 论文作者：王华 ; 方妍 ; 鲍忠赞 ; 金鑫 ; 朱文娟 ; 王立鹏 ; 刘腾 ; 纪海鹏 ; 徐世清 ; 司马杨虎
• 年：2016
• 作者机构：苏州大学医学部基础医学与生物科学学院;现代丝绸国家工程实验室;
• 论文关键词：家蚕 ; 小热激蛋白 ; 原核表达 ; 免疫荧光
• 会议召开时间：2016-07-01
• 会议录名称：第十二届家（柞）蚕遗传育种暨良种繁育学术研讨会论文集（摘要汇编）
• 语种：中文
• 分类号：S881.2
• 学会代码：ZGCU
• 会议名称：第十二届家（柞）蚕遗传育种暨良种繁育学术研讨会
• 会议地点：中国重庆
• 主办单位：中国蚕学会、国家蚕桑产业技术体系
• 学会名称：中国蚕学会
• 页数：1
• 文件大小：681k
• 原文格式：D
• 会议级别：全国

摘要

研究家蚕对高温胁迫的基因差异表达对于阐明家蚕对高温胁迫的应急反应机制及其抗高温机制具有重要的参考意义。本研究从家蚕高温数字基因表达谱(DGE)文库中筛选得到一个差异显著的Tag,Blast比对其在Silk DB上对应的预测基因为BGIBMGA005823-TA,定位在5号染色体,与小热激蛋白家族的同源性最高,命名为BmHsp27.4。运用RACE技术克隆得到长为944bp的基因序列(Gene Bank number:AK382044),其ORF长为741bp,编码246个氨基酸,分子量27417,理论等电点为5.86。蛋白质同源性分析发现BmHsp27.4区别于以往发现的小热激蛋白属于单独的一支,预测1-20号氨基酸序列为信号肽。EST表达谱分析结果表明Bms HSP27.4在家蚕脑、眼、脂肪体中高表达,其mRNA在高温环境中的家蚕脂肪体中呈现上调表达的趋势,并且雌性家蚕比雄性家蚕上调幅度更大。将去信号肽后的ORF与pET-28a(+)载体连接构建质粒,并转化大肠杆菌Rosseta(DE3)进行原核表达,纯化后的融合蛋白免疫BALB/c小鼠获得抗血清。通过Western blot技术和免疫荧光切片研究BmHsp27.4在正常和高温环境家蚕体内的变化,结果显示在高温环境中BmHsp27.4蛋白水平变化与mRNA水平变化一致。这些结果表明:BmHsp27.4可能在家蚕耐高温胁迫中发挥作用。

引文