稻曲病菌T-DNA插入突变体B2510的插入位点分析

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• 论文作者：丁慧 ; 俞咪娜 ; 王亚会 ; 于俊杰 ; 尹小乐 ; 薄惠文 ; 黄星 ; 刘永锋
• 年：2016
• 作者机构：江苏省农业科学院植物保护研究所;南京农业大学生命科学学院;
• 论文关键词：稻曲病菌 ; T-DNA插入突变 ; ATMT转化 ; 致病力 ; 侧翼序列
• 会议召开时间：2016-08-05
• 会议录名称：中国植物病理学会2016年学术年会论文集
• 英文会议录名称：Proceedings of the Annual Meeting of Chinese Society for Plant Pathology(2016)
• 语种：中文
• 分类号：S435.111.4
• 学会代码：ZGVS
• 会议名称：中国植物病理学会2016年学术年会
• 会议地点：中国江苏南京
• 主办单位：中国植物病理学会
• 学会名称：中国植物病理学会
• 页数：1
• 文件大小：60k
• 原文格式：O
• 会议级别：全国

摘要

水稻稻曲病是由稻曲病菌(Ustilagrnoidea virens)侵染引起的水稻穗部真菌病害,近年来已逐渐成为水稻的主要病害之一。深入了解稻曲病的致病机理,可为抗病水稻的育种和新靶标药剂的开发提供理论依据。本研究以稻曲病菌T-DNA插入突变体库中致病力减弱突变菌株B2510为材料,通过分析T-DNA插入位点的侧翼序列和突变基因,克隆在稻曲病菌致病过程中起作用的基因。通过测定突变菌株B2510的生长速率、产孢能力及致病力发现,与野生型菌株P1相比,B2510田间接种表现为致病减弱;在MM培养基上生长速率下降,而在PSA和TB_3培养基中生长速率与野生型没有显著差异,但丧失产孢能力。Southern杂交显示T-DNA在突变菌株B2510中以双拷贝形式插入,利用TAIL-PCR技术扩增紧邻T-DNA两侧的侧翼序列,经过比对分析发现,T-DNA分别插在基因UVC6TF(与稻曲病菌Uv8b菌株的UV8b_1412基因同源)的启动子区域和UVRASGAP(与稻曲病菌Uv8b菌株的UV8b_1386基因同源)的下游3′端。半定量RT-PCR分析基因的表达情况,显示两个基因在突变体B2510的表达量较P1均显著下降,推测T-DNA插入位点处的基因与稻曲病菌致病性相关,参与调控稻曲病菌在水稻上的致病过程。为进一步了解基因的功能,我们构建基因UVC6TF的沉默载体,并通过ATMT的方法导入稻曲病菌。获得的2个沉默转化子中UVC6TF的表达分别被抑制了50%和90%。分析它们的产孢量、生长速率等生物学性状和致病力检测,结果发现该基因不影响菌株正常的生长发育,但产孢能力降低,致病能力减弱。此外,T-DNA插入还破坏了基因UVRASGAP的表达,后续研究则是对单个基因或是两个基因进行基因敲除、回补等方法,进一步研究基因功能,研究结果将对稻曲病菌在水稻上的致病过程解析具有重要意义。

引文