蝎毒多肽提取物对肝癌中VEGF及自然杀伤细胞活性的影响
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摘要
背景:研究表明肝癌患者机体内NK细胞活性及绝对数量降低,同时肿瘤浸润NK细胞呈现为VEGF表达阳性。本课题组研究证明蝎毒多肽提取物(polypeptide extract from scorpion venom,PESV)可抑制肿瘤细胞VEGF的表达,同时对肝脏NK细胞的活化具有明显的刺激作用。目的:观察PESV对肝癌组织中血管内皮生长因子(VEGF)以及自然杀伤细胞(NK)细胞活性的调节作用机制,为进一步探讨PESV调节机体天然免疫、抗肿瘤活性提供新策略。材料方法:流式细胞术检测各药物干预组对人肝癌细胞株HepG2细胞表面m MICA的表达;LDH细胞毒性检测法检测NK细胞的杀伤作用;构建H22肝癌原位移植瘤小鼠模型,分组给药后观察肝肿瘤组织变化及其荷瘤生存期;采用流式细胞术检测小鼠肝脏、脾脏中CD3-NK1.1+细胞及其表面NKG2D的表达;实时定量PCR法检测肝脏肿瘤组织中VEGF、穿孔素、颗粒酶B mRNA表达。结果:1.PESV显著提高HepG2细胞表面m MICA的表达,增强NK细胞的杀伤活性(P<0.05);2.PESV大剂量组显著抑制移植瘤小鼠瘤组织的生长,抑瘤率为30.77%,能显著延长荷瘤小鼠生存时间(P<0.05);3.PESV提高荷瘤小鼠肝脏及脾脏NK细胞浸润,促进其表面活化性受体NKG2D的表达(P<0.05);4.与荷瘤对照组比较,PESV大剂量组肿瘤组织中穿孔素和颗粒酶B的mRNA表达量增加,VEGF mRNA表达降低(P<0.05)。结论:细胞是机体天然免疫系统中重要成员之一,具有抗感染、抗肿瘤的活性,被认为是机体的"第一道防线"。NK细胞发挥其杀伤活性主要依赖其表面的活化性受体识别并结合靶细胞表面的配体并活化、产生释放细胞毒性颗粒,对靶细胞实施杀伤。在肝癌发生过程中,由于肿瘤微环境及肿瘤细胞自身分泌大量的VEGF等抑制性细胞因子,NK细胞数量降低,杀伤肿瘤细胞活性被显著抑制,提高NK细胞杀伤活性被认为是抗肿瘤免疫疗法的重要方面。PESV具有多种抗肿瘤活性机制,本研究表明PESV通过降低肿瘤中VEGF的基因表达,提高肿瘤组织中NK细胞的频数,通过活化MICA-NKG2D途径促使NK细胞发挥更强杀伤肿瘤活性,从而有效抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长,为一步研究抗肿瘤天然免疫及PESV临床抗肿瘤研究提供实验依据。
引文