改进的Coca's液提取户尘螨过敏原蛋白的效果探究
详细信息 查看官网全文
- 论文作者：刘小萍 ; 王莉 ; 吴善
- 年：2013
- 作者机构：江西省萍乡市中医院检验科;杭州浙大迪迅生物基因工程有限公司;
- 论文关键词：尘螨 ; 提取方法 ; 过敏原 ; ELISA
- 会议召开时间：2013-09-13
- 会议录名称：第四届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛论文汇编
- 语种：中文
- 分类号：R446.6
- 学会代码：WSWZ
- 会议名称：第四届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛
- 会议地点：中国江苏无锡
- 主办单位：中国微生物学会临床微生物学专业委员会、医学参考报社、宁波大学医学院附属医院
- 学会名称：中国微生物学会临床微生物学专业委员会
- 页数：1
- 文件大小：38k
- 原文格式：O
- 会议级别：全国
摘要
目的:采用改进的Coca's液提取户尘螨螨体中的蛋白,提高提取液的蛋白浓度和过敏原蛋白的效价。方法:1.细胞破碎:取样品于研钵内,液氮反复冻融4次,每次间隔10min,在研钵内反复研磨冻融后的样品。2.蛋白提取:在离心管中加入10ml Coca's液,4℃匀速搅拌4 h后置于4℃冰箱过夜。3.离心:4℃,15000×g离心1h,取上清液备用。4.测提取蛋白的浓度:Bradford Reagent法测其提取蛋白的浓度。5.SDS-PAGE电泳:参照Tricine-SDS-PAGE配制10%分离胶和4%浓缩胶,上样10ul。6.采用酶联免疫吸附实验(ELISA)进行本研究获得的提取液与进口户尘螨过敏原蛋白产品的功能性比较。结果:本研究中户尘螨过敏原蛋白提取液的蛋白浓度为3.0mg/ml,远高于的0.35mg/ml;且电泳图显示包含分子量为25kDa、14kDa的户尘螨主要过敏原蛋白Derp 1、DerP 2条带,蛋白浓度也高于美国ALLERMED公司产品相应的条带;功能性实验中也表明本研究中户尘螨过敏原蛋白提取液的免疫效价也显著高于美国ALLERMED公司产品。结论:可以用本研究的方法来大量提取户尘螨过敏原蛋白,提取液可替代进口产品,用作户尘螨过敏原检测试剂的生产原料或用于户尘螨过敏原皮试、点刺及脱敏治疗等,降低这些产品的生产成本,进而降低国内户尘螨过敏的诊疗费用。
引文