黄芪根腐病多功能颉颃芽孢杆菌的筛选与鉴定
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摘要
根际促生菌(PGPR)可以促进矿质营养吸收和利用,产生促进植物生长的次生代谢物以及抑菌物质,从而促进植物生长或抑制病原微生物。芽孢杆菌作为一类重要的PGPR菌,具有很强的环境适应性和友好性,在土传病害的防治中显示出了巨大潜力。黄芪作为山西道地中药材素有"十药八芪"之称,近年来根腐病普遍发生,严重影响了其产量和质量,亟待开发符合GAP种植规范要求的有效防控技术。目前,利用PGPR防治黄芪根腐病仅有个别报道。本课题前期以山西黄芪根腐病优势病原菌Fusarium solani和Fusarium acuminatum为靶标,筛选获得了具有抑菌作用的颉颃菌30株,但未对其进行促生功能的测定与评价。基于此,我们以分布最广泛的代表性病原菌F.solani为靶标,采用同步-平板对峙和发酵液—牛津杯法对上述颉颃菌进行抑菌活性稳定性评价,并对抑菌效果显著且稳定性良好的9株颉颃菌进行室内促生性能测定,结果显示:菌株G10无论是活体平板对峙试验,还是牛津杯法测定发酵液活性,均表现出了明显且稳定的抑菌效果,发酵液抑菌圈透明、清晰,直径达18.38mm(孢子悬液浓度:20~30个/视野,10×15倍数下;400mL孢子悬液/500mLPDA培养基;20mL/皿;发酵液加样:200mL);同时,菌株G10还具有溶磷能力、固氮能力、淀粉酶活性、产IAA、产HCN等5项促生长特性。参照《伯杰氏细菌鉴定手册(第8版)》和《常见细菌系统鉴定手册》对菌株G10的菌体形态和菌落特征进行观察,并测定其生理生化特性,结果表明:菌株G10与枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)特征相符;16SrDNA序列同源性分析显示,该菌与B.subtilis同源性最高,达98%,且在系统发育树上聚为一枝,亲缘关系最近,可确定该菌为B.subtilis;为了进一步验证鉴定结果,又采用BBL Crystal~(TM)细菌鉴定仪进行鉴定,结果与形态及分子鉴定相符。因此,最终将菌株G10的分类地位归属为枯草芽孢杆菌B.subtilis。综上所述,多功能枯草芽孢杆菌G10不仅对黄芪根腐病优势病原菌具有较强的颉颃作用,且具多项促生能力,是开发黄芪根腐病专用微生物农药的有效物质基础。
引文

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