摘要
目的利用昆虫杆状病毒表达系统构建肠道病毒71型及柯萨奇病毒16型(EV71/CA16)联合P1基因(HP1)重组杆状病毒。方法利用重叠PCR的原理,设计合成EV71/CA16联合P1基因;HP1基因与载体pFastbac1连接后转化DH5α感受态细胞,筛选获得HP1-pFastbac1重组质粒后,转化DH10Bac感受态细胞,通过基因转座、蓝白斑筛选获得重组穿梭杆粒HP1-bacmid;提取纯化重组杆粒后,转染sf9细胞,收获重组杆状病毒。结果成功合成HP1基因;完成HP1与pFastbac1载体连接;获得了重组穿梭杆粒HP1-bacmid;并通过转染sf9细胞,获得具有感染活性的重组杆状病毒。结论成功构建了EV71/CA16联合P1基因重组杆状病毒,为下一步EV71/CA16联合P1基因的表达鉴定打下基础,并为兼抗EV71、CA16疫苗的研究提供参考。
引文