诊断家畜日本血吸虫病胶体金免疫层析试纸条的研制

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• 论文作者：许瑞 ; 赵登云 ; 陆珂 ; 李浩 ; 洪炀 ; 林矫矫 ; 朱传刚
• 年：2016
• 作者机构：中国农业科学院上海兽医研究所农业部寄生虫学重点开放实验室国家防治动物血吸虫病专业实验室;
• 会议召开时间：2016-07-20
• 会议录名称：中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第五次学术研讨会论文集
• 语种：中文
• 分类号：S855.9
• 学会代码：SYGW
• 会议名称：中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第五次学术研讨会
• 会议地点：中国内蒙古通辽
• 主办单位：中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会
• 学会名称：中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会
• 页数：2
• 文件大小：485k
• 原文格式：D
• 会议级别：全国

摘要

目的家畜是日本血吸虫病的主要保虫宿主,而可感染的家畜种类众多。为适应基层家畜血吸虫病筛查需要,研制针对多种动物的胶体金免疫层析试纸条(GICA法)。方法根据链球菌蛋白G(SPG)具有与多种动物的Ig G结合特性,设计重组蛋白G(r SPG)的基因序列,构建r SPG的原核表达质粒,亲和层析纯化重组蛋白,ELISA测定r SPG与不物种Ig G的亲和力。将r SPG进行胶体金标记,探索蛋白标记的最佳p H值和标记量,制备金标垫,分别用SEA和r SPG作为检测线和质控线,确定其最佳划线浓度与血清检测的最佳稀释度。用组装好的试纸条检测标准阴、阳性BALB/c鼠与新西兰大白兔血清,以及粪检阴、阳性的山羊血清、水牛血清,评估其敏感性和特异性;检测前后盘吸虫病牛血清、捻转血矛线虫病羊血清、东毕吸虫病羊血清评价其交叉反应性。用GICA法和ELISA法分别对不同感染强度的水牛血清进行检测。对人工感染的水牛阴、阳性血纸和从疫区采集的水牛血纸分别用GICA法和ELISA法进行检测,评估实际检测效果。结果获得了可溶性表达的r SPG,与四个物种Ig G亲和力与商品化链球菌蛋白G一致。胶体金标记r SPG的最佳p H值为5.0、最佳标记量为10μg/ml;检测线和质控线的最佳划线浓度均为0.5 mg/m L;血清检测最佳稀释度为1:20。研制的试纸条可用于日本血吸虫感染小鼠、新西兰大白兔、水牛、山羊血清抗体检测,检测感染小鼠与兔血清的敏感性、特异型均为100.0%。检测山羊、水牛血清的敏感性为100.0%,与ELISA法相同;检测山羊、水牛特异性为88.64%和94.23%,高于ELISA法的75.0%和84.62%。与前后盘吸虫、捻转血矛线虫、东毕吸虫感染血清交叉反应率分别为14.29%、16.67%、33.33%,低于ELISA法。在感染强度<20条/头时,GICA法的敏感性为75.0%,低于ELISA法的100.0%。在感染强度>20条/头时,GICA法和ELISA法的敏感性均为100.0%。对水牛血纸进评估时,对于实验室人工感染水牛血纸GICA法和ELISA法的敏感性和特异性均为100.0%,并且对疫区采集的水牛血纸进行检测时两种方法之间无统计学差异。结论成功表达了重组链球菌蛋白G,并研制出能检测多种家畜血吸虫病的胶体金免疫层析试纸条,其检测家畜血吸虫感染的灵敏度和特异度均较高。

引文