玉米大斑病菌StKU80基因敲除突变体的获得
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- 论文作者：郑亚男 ; 杨晓荣 ; 刘星晨 ; 赵立卿 ; 赵洁 ; 冯胜泽 ; 巩校东 ; 韩建民 ; 谷守芹 ; 董金皋
- 年：2016
- 作者机构：河北农业大学真菌毒素与植物分子病理学实验室;
- 论文关键词：玉米大斑病菌 ; StKU80 ; 突变体
- 会议召开时间：2016-08-05
- 会议录名称：中国植物病理学会2016年学术年会论文集
- 英文会议录名称：Proceedings of the Annual Meeting of Chinese Society for Plant Pathology(2016)
- 语种：中文
- 分类号：S435.131.4
- 学会代码：ZGVS
- 会议名称：中国植物病理学会2016年学术年会
- 会议地点：中国江苏南京
- 主办单位：中国植物病理学会
- 学会名称：中国植物病理学会
- 页数：1
- 文件大小：57k
- 原文格式：O
- 会议级别：全国
摘要
玉米大斑病(Northern Leaf Blight of Corn)是世界各地玉米产区的一种重要真菌病害,引起玉米大斑病的病原菌为大斑凸脐蠕孢菌(Exserohilum turcicum),有性态为大斑刚毛座腔菌(Setosphaeria turcica)。在生产中该病害的发生常造成玉米严重减产及品质下降,并因此带来巨大的经济损失。虽然目前生产上仍然以使用化学药剂防治玉米大斑病,但由于发病时施药极其困难,因而在生产上防治该病以选育种植抗病品种为主,并辅以栽培措施。近年来,通过分子生物学手段,立足于对病原菌的致病性调控机制的研究,探索更加有效的防治途径,寻找新的药物靶标,研制新型有效的杀菌剂越来越受到研究者的普遍关注。本研究通过搜索玉米大斑病菌基因组数据库,克隆得到了非同源末端连接途径中的关键基因StKU80,该基因DNA全长为2 439bp,cDNA为2 199bp,包含5个外显子和4个内含子,编码733个氨基酸;对其蛋白质序列分析发现,StKU80基因包含ku70/ku80特有的vWa、Ku78和KuPK-bind 3个结构域。本研究进一步在克隆了StKU80基因的基础上,以pBS-pUC载体为基本骨架、草胺磷抗性基因(BAR)作为筛选标记,成功构建了StKU80基因敲除载体;采用PEG4000介导的原生质体转化的方法,将StKU80基因敲除载体转化病菌原生质体,经0.2‰草胺磷筛选后,得到可正常生长的单菌落。将菌落在含有0.2‰草胺磷培养基上连续筛选3代以上,仍可稳定生长的菌株即为StKU80基因敲除转化子;然后通过草胺磷抗性筛选、特异引物PCR、RT-PCR、Southern blotting验证,最终获得2株StKU80基因敲除突变体,分别命名为△StKU80-1、△StKU80-2。该研究不仅可为分析StKU80基因的功能奠定基础,也为筛选玉米靶基因敲除受体提供研究材料。
引文