拟南芥AtBT4原核表达载体pGEX4T-1-BT4构建及其诱导表达的优化
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- 论文作者：郑旭 ; 黄聪聪 ; 王冠宇 ; 赵亚婷 ; 邢继红 ; 董金皋
- 年：2016
- 作者机构：河北农业大学真菌毒素与植物分子病理学实验室;
- 论文关键词：拟南芥 ; AtBT4 ; 互作蛋白 ; 原核表达
- 会议召开时间：2016-08-05
- 会议录名称：中国植物病理学会2016年学术年会论文集
- 英文会议录名称：Proceedings of the Annual Meeting of Chinese Society for Plant Pathology(2016)
- 语种：中文
- 分类号：S432.23
- 学会代码：ZGVS
- 会议名称：中国植物病理学会2016年学术年会
- 会议地点：中国江苏南京
- 主办单位：中国植物病理学会
- 学会名称：中国植物病理学会
- 页数：1
- 文件大小：35k
- 原文格式：O
- 会议级别：全国
摘要
本实验室前期获得了拟南芥抗病新基因AtBT4,该基因正调控拟南芥对灰葡萄孢的抗性。AtBT4蛋白属于转录调节因子,并且具有DNA结合活性。通过酵母双杂交实验获得了7个可以与转录调节因子互作的蛋白。本研究以拟南芥野生型cDNA为模板克隆AtBT4基因,通过酶切、连接使其与含有GST标签蛋白的pGEX4T-1载体构成重组载体;经菌液PCR、双酶切和测序鉴定正确后,将重组载体pGEX4T-1-BT4转化大肠杆菌BL21。在不同培养温度、不同诱导时间条件下诱导表达AtBT4蛋白,SDS-PAGE结果显示:pGEX4T-1-BT4载体所表达目的蛋白大小约69kDa,预期大小一致,原核表达蛋白正确。在不同培养温度18℃、28℃、37℃条件下,37℃时表达量较高;在不同诱导培养时间2h、4h、6h条件下,4h时即可高效表达;由此确定了pGEX4T-1-BT4载体在大肠杆菌BL21中高效表达的条件。由于pGEX4T-1-BT4载体所表达的蛋白带有GST标签,我们可以进一步通过pulldown技术鉴定前期由酵母双杂交筛选得到的AtBT4互作蛋白;为阐明AtBT4调控拟南芥抗灰霉病的分子机制奠定基础。
引文