幽门螺杆菌26695与其克拉霉素耐药衍生株的比较蛋白质组学研究

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• 论文作者：丁钰
• 年：2017
• 作者机构：北京大学第三医院;
• 论文关键词：幽门螺杆菌 ; 耐药 ; 克拉霉素 ; 蛋白质组学
• 会议召开时间：2017-04-08
• 会议录名称：中国生物工程学会第二届青年科技论坛暨首届青年工作委员会学术年会论文集
• 语种：中文
• 分类号：R96
• 学会代码：IGSV
• 会议名称：中国生物工程学会第二届青年科技论坛暨首届青年工作委员会学术年会
• 会议地点：中国广东广州
• 主办单位：中国生物工程学会青年工作委员会
• 学会名称：中国生物工程学会
• 页数：1
• 文件大小：356k
• 原文格式：D
• 会议级别：全国

摘要

目的:通过高通量的蛋白质组学技术,研究幽门螺杆菌标准菌株26695(H.pylori 26695)在克拉霉素药物压力作用下由敏感株转化为耐药株后,蛋白质表达模式的变化,探索幽门螺杆菌对克拉霉素耐药的可能机制。方法:(1)本研究选择H.pylori 26695作为出发菌株,进行体外培养,并利用克拉霉素药物浓度倍增的方法经实验室诱导获得H.pylori 26695克拉霉素耐药菌株,经药敏试验测定其最小抑菌浓度后连续传代3次以上,再次测定其最小抑菌浓度,以确定克拉霉素耐药株的稳定性。(2)分别提取H.pylori 26695敏感株及克拉霉素耐药株的全菌蛋白,用BCA法测定蛋白浓度后,用TMT试剂进行标记,利用Q Exactive plus质谱仪进行检测,得到的质谱数据使用Thermo Proteome Discoverer进行数据库检索和蛋白质鉴定,并利用网络蛋白质数据库和相关的文献资料对差异蛋白进行具体分析。结果:(1)本研究经实验室成功诱导获得稳定的H.pylori 26695克拉霉素耐药菌株,最小抑菌浓度稳定为32μg/mL。(2)本研究通过质谱检测分析,在H.pylori 26695敏感株和耐药株之间共发现30个表达差异的蛋白质点并得到其可靠信息,其中有28个蛋白质点在耐药株中表达降低,2个蛋白质点在耐药株中的表达升高。差异蛋白质主要包括三大代谢相关酶类、细菌分裂、分子伴侣、DNA修复相关蛋白质、细胞结构相关蛋白质、细菌毒性以及信号传导相关蛋白质。(3)耐药株表达升高的蛋白质点之一为HP0110,即热休克蛋白Grp E,是热休克蛋白超家族70重要成员之一,被认为是一种负性调控基因,而Grp E与DnaK同时存在产生作用时会使细菌能够适应更为苛刻的酸性环境,这可能会提高幽门螺杆菌耐药株对胃内酸环境的耐受力,影响药物的根除效果。耐药株表达升高的另一蛋白质为HP1340,即生物聚合物转运蛋白Exb D,是一种依赖TonB的膜转运蛋白,其在耐药株中标的升高的意义有待进一步研究讨论。结论:在克拉霉素外界药物压力作用下,幽门螺杆菌自身蛋白表达发生了多种变化,提示幽门螺杆菌克拉霉素耐药株的形成与多种蛋白质相关,幽门螺杆菌在克拉霉素药物压力下存活有着复杂的机制,涉及细菌生物学功能的不同过程,需要进一步进行分析和研究。

引文