肿瘤-睾丸抗原HCA587/MAGE-C2调控STAT3信号通路促进肿瘤细胞转移

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• 论文作者：宋肖 ; 郝佳庆 ; 王菁菁 ; 郭成立 ; 王滢 ; 唐辉 ; 秦晓丹 ; 李燕 ; 张毓 ; 尹艳慧
• 年：2016
• 作者机构：北京大学医学部;
• 论文关键词：肿瘤-睾丸抗原 ; HCA587/MAGEC2 ; STAT3 ; 肿瘤转移
• 会议召开时间：2016-11-04
• 会议录名称：第十一届全国免疫学学术大会摘要汇编
• 英文会议录名称：Abstracts of 2016 CSI Congress on Immunology
• 语种：中文
• 分类号：R730.3
• 学会代码：IGMD
• 会议名称：第十一届全国免疫学学术大会
• 会议地点：中国安徽合肥
• 主办单位：中国免疫学会
• 学会名称：中国免疫学会
• 页数：1
• 文件大小：1291k
• 原文格式：D
• 会议级别：全国

摘要

背景及目的:肿瘤-睾丸抗原HCA587(又名MAGE-C2)在正常组织仅局限表达于睾丸,而在多种类型肿瘤组织中高表达。目前HCA587的生物学功能尚不明确,本研究从免疫共沉淀-质谱分析入手,寻找HCA587相互作用分子,探索HCA587在肿瘤发生、发展中的作用。方法及结果:通过在细胞中外源表达FLAG-HCA587融合蛋白,经免疫共沉淀、质谱分析,筛选到STAT3为HCA587的潜在相互作用蛋白,进一步利用免疫共沉淀实验证明二者存在相互作用,且HCA587的MHD结构域是介导HCA587与STAT3结合的关键区域。利用免疫荧光、Duolink实验及免疫共沉淀实验证明了内源性HCA587在细胞核内与磷酸化的STAT3分子结合,在IL-6的刺激下,二者结合增强。HCA587对维持细胞内STAT3(Tyr705)的磷酸化水平至关重要:在细胞中稳定过表达HCA587,可提高STAT3(Tyr705)磷酸化水平;敲低HCA587则使细胞内STAT3(Tyr705)的磷酸化水平明显降低。在敲低HCA587的细胞中加入蛋白酶体抑制剂可部分逆转STAT3(Tyr705)水平的降低,体内泛素化实验也证明敲低HCA587后,STAT3(Tyr705)的泛素化水平明显升高,此结果在利用CRISPR/CAS9系统建立的HCA587敲除细胞中得到进一步验证。我们在细胞培养中观察到HCA587敲低或敲除后,细胞形态发生明显变化,由阿米巴型运动模式转化成间质型运动模式,在敲除HCA587的细胞中稳定过表达持续活化形式的STAT3(STAT3C)可逆转这一现象。进一步研究证明HCA587对阿米巴型运动中关键信号通路Rho A-ROCK-MLC2具有调控作用,敲低HCA587可降低Rho A活化及MLC2的磷酸化水平。小鼠体内成瘤实验证明HCA587可以促进肿瘤细胞转移,稳定过表达STAT3C可部分逆转HCA587敲除的影响。免疫组化染色显示肝癌患者肿瘤组织标本中HCA587与磷酸化STAT3(Tyr705)的表达存在正相关,且与转移相关。结论:HCA587与磷酸化STAT3存在相互作用并抑制其泛素化降解,维持其磷酸化水平,进而影响Rho AROCK-MLC2信号通路的活化,调控肿瘤细胞的运动模式转换,促进肿瘤细胞的转移。

引文