丁香假单胞大豆致病变种S1菌株的HrpZ_(PsgS1)蛋白诱导抗病性和促进植物生长的功能域研究
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摘要
植物病原细菌丁香假单胞菌编码产生的HrpZ蛋白能够在非寄主植物和抗病植物上激发过敏(hypersensitive response,HR)反应,具有诱导植物抗病性及促进植物生长等有益生物学效应。本研究以丁香假单胞大豆致病变种S1菌株的HrpZ_(PsgS1)为对象,研究该HrpZ蛋白中决定激发HR、诱导抗病和促生等生物学效应的功能结构域。生物信息学分析表明,HrpZPsgS1含有1个β折叠和9个α螺旋,这9个α螺旋对蛋白质的空间结构的形成至关重要。本研究利用常规PCR和反向PCR等构建了11个HrpZ_(PsgS1)突变体,这些突变体缺失了不同的α螺旋区域或者连接区域。诱导烟草HR活性检测表明,缺失了HrpZ_(PsgS1)C-端的重组蛋白HrpZ_(1-102)、HrpZ_(△195~238)、HrpZ_(△241~248)、HrpZ_(△254~298)、HrpZ_(△290~313)诱导HR能力降低;除HrpZ_(200~346),缺失了N-端的重组蛋白诱导HR能力与全长没有差别;而HrpZ_(74~204)和HrpZ_(1~194)则丧失了诱导HR的能力,但仍能够激发烟草的微敏反应。这表明,HrpZ_(PsgS1)的C-端是负责调控HR的关键功能域,缺失C-端的重组蛋白HR能力减弱,而N-端的特定部分对HR具有调控作用。诱导植物抗病性和促进植物生长的活性检测结果表明,突变体HrpZ_(△89~124)和HrpZ_(△254~298)诱导烟草抗TMV、诱导水稻抗白叶枯病及促进水稻生长的活性都显著增强。同时Real-time PCR检测结果表明,HrpZ_(△89~124)和HrpZ_(△254~298)激活了比全长更高水平的HR、抗病、促生相关基因的转录表达。本研究表明,重组蛋白HrpZ_(△89~124)和HrpZ_(△254~298)具有开发成生物蛋白农药的潜力。
引文

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