不同水平葡萄糖、赖氨酸对猪小肠上皮细胞转运载体SGLT1、y+LAT1 mRNA表达量的影响
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摘要
本试验以猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)为模型,研究不同水平葡萄糖、赖氨酸对猪小肠上皮细胞葡萄糖、赖氨酸转运载体SGLT1、y+LAT1 mRNA相对表达量的影响。在长势良好的细胞中添加新配制的含不同浓度葡萄糖(25、75和225 mmol/L)、赖氨酸(0、0.5、1、2和4 mmol/L)的培养液处理细胞20、40、80、160 min后,采用Trizol抽提法提取总RNA,参照Genbank上猪的SGLT1和y+LAT1序列,进行实时荧光定量PCR引物设计,常规PCR扩增后,测定转运载体SGLT1和y+LAT1的mRNA相对表达量,探讨葡萄糖和赖氨酸在猪小肠上皮细胞上的吸收规律。结果表明:(1)不同浓度葡萄糖处理细胞不同时间,葡萄糖转运载体SGLT1 mRNA相对表达量总体呈现先升高后降低的趋势,不同浓度葡萄糖处理细胞20 min,与对照组相比,225 mmol/L葡萄糖处理组SGLT1 mRNA相对表达量最高,差异显著(P<0.05),75 mmol/L葡萄糖处理组差异不显著(P>0.05)。处理40 min,75 mmol/L葡萄糖处理组SGLT1 mRNA表达量最高,其次为225 mmol/L葡萄糖处理组,差异显著(P<0.05),最后为25 mmol/L葡萄糖处理组,差异显著(P<0.05)。处理80 min,25和75 mmol/L葡萄糖处理组SGLT1 mRNA表达量最高,差异显著(P<0.05),其次为225 mmol/L葡萄糖处理组,差异显著(P<0.05)。处理160 min,75 mmol/L葡萄糖处理组SGLT1 mRNA表达量显著高于其他两组(P<0.05)。且葡萄糖转运载体SGLT1mRNA相对表达量的最适葡萄糖浓度和时间点为:75 mmol/L、40 min。(2)不同浓度赖氨酸处理细胞不同时间,赖氨酸转运载体y+LAT1 mRNA相对表达量总体呈现先升高后降低的趋势,不同浓度赖氨酸处理细胞20 min,y+LAT1 mRNA的相对表达量不断提高,差异显著(P<0.05)。处理40 min,与对照组相比,2 mmol/L赖氨酸处理组的y+LAT1 mRNA的相对表达量最高,差异显著(P<0.05),其次为0.5、1和4 mmol/L处理组,差异显著(P<0.05)。处理80 min,2 mmol/L赖氨酸处理组y+LAT1 mRNA的相对表达量最高,其次是0.5和1mmol/L赖氨酸处理组,最后为4 mmol/L赖氨酸处理组,差异显著(P<0.05)。处理160 min,显著降低了y+LAT1 mRNA的相对表达量(P<0.05)。且赖氨酸转运载体y+LAT1 mRNA相对表达量的最适赖氨酸浓度和时间点为:2 mmol/L、40 min。结果显示,细胞对赖氨酸、葡萄糖的有效摄取,有助于提高葡萄糖、赖氨酸转运载体SGLT1、y+LAT1的mRNA表达量,同时对生产上提高机体能氮平衡具有重要指导意义。
引文

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