赖氨酸在奶牛乳腺上皮细胞中的代谢机制研究
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摘要
本试验旨在研究氨酸(Lys)在奶牛乳腺上反细胞(BMEC)中的代谢走向,为确定奶牛理想氨基酸模式奠定基础。采集并培养BMEC,采用不同浓度(0 mmol/L,0.5 mmol/L,1 mmol/L,1.5 mmol/L,2 mmol/L)Lys对饥饿预处理的BMEC进行不同时间的继续培养。试验一.继续培养96 h,采用~3H标记的苯丙氨酸检测Lys对细胞内总蛋白合成和降解速率的影响;不同浓度~(14)C标记的Lys培养BMEC 2 h,收集CO_2 1h,检测CO_2生成量及进入蛋白的量;试验二.继续培养6 h、12 h和24 h,检测代谢赖氨酸关键酶赖氨酸酮戊二酸还原酶(LKR)及酵母氨酸脱氢酶(SDH)mRNA表达,及表达最高时间点时氨基乙二酸半醛合酶(AASS)表达量。结果表明:1)Lys浓度为1 mmol/L或1.5 mmol/L时,总蛋白合成速率明显高于其他组(P<0.01),但两组间无明显差异(P>0.05);Lys浓度在0 mmol/L时,总蛋白降解速率明显高于其他组(P<0.01),而其他处理组间总蛋白降解速率无明显差异(P>0.05)。随Lys浓度升高,生成二氧化碳的量、进入蛋白合成的比例逐渐升高,各处理组间差异显著(P<0.01)。2)LKR和SDH-H mRNA表达量在6h时最高(P<0.01)。随Lys浓度升高,LKR和SDH mRNA表达量相对增加;Lys浓度为1.5 mmol/L或2.0 mmol/L时,AASS表达量最高,且两者并无明显差异(P>0.05)。结论:适宜浓度的赖氨酸,能够促进细胞内蛋白合成、抑制蛋白降解。随Lys浓度升高,赖氨酸代谢关键酶的活力增加,Lys代谢为二氧化碳和进入蛋白合成的量明显提高。
引文