基因Ⅶ型新城疫病毒样颗粒的构建及免疫效果研究
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- 论文作者：袁乾亮 ; 尹仁福 ; 钱晶 ; 薛聪 ; 穆昱 ; 丁壮
- 年：2016
- 作者机构：吉林大学动物医学学院;
- 论文关键词：新城疫病毒 ; 基因Ⅶ型 ; 病毒样颗粒 ; 昆虫细胞-杆状病毒表达系统 ; 排毒量
- 会议召开时间：2016-07-20
- 会议录名称：中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第五次学术研讨会论文集
- 语种：中文
- 分类号：S852.65
- 学会代码：SYGW
- 会议名称：中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第五次学术研讨会
- 会议地点：中国内蒙古通辽
- 主办单位：中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会
- 学会名称：中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会
- 页数：3
- 文件大小：527k
- 原文格式：D
- 会议级别：全国
摘要
目前,基于新城疫病毒相关分子流行病学数据分析表明基因VII型已然成为危害我国养禽业的主要优势基因型,而市售疫苗为基因II型La Sota株,其与流行株之间被证明具有抗原差异,是造成免疫偏差的主要原因之一,这也提示我们使用与流行株基因型一致的疫苗株防控新城疫无疑具有很大的优势和潜力。病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)是近年来研究的热点,它是一类缺少病毒任何感染性遗传物质但与原病毒颗粒形态极为相似的空心蛋白颗粒,其作为疫苗使用时,具有很大的防控潜力。本研究利用昆虫细胞-杆状病毒表达载体系统,分别构建了含有新城疫强毒株M、F和HN三个结构基因的单顺反子重组杆粒,分别转染Sf9细胞后,进行细胞病变观察、PCR鉴定以及间接免疫荧光法检测表明成功构建了三种重组杆状病毒;进一步通过HA试验优化确定共感染策略,收集共感染后的Sf9悬浮细胞培养上清经超速离心浓缩,蔗糖密度梯度纯化后进行SDS-PAGE,Western blot和透射电子显微镜技术检测,结果表明三种目的蛋白均正确表达且组装成与新城疫病毒形态相似的颗粒,血凝活性测定效价可达212HAU。与La Sota灭活油乳苗相比,将纯化后的病毒样颗粒以含25μg蛋白的剂量或联合矿物油佐剂免疫商品蛋鸡后能够产生较高水平的HI抗体,此外,二次免疫后产生HI抗体周期更短,滴度更高,持续时间更长,能够有效保护整个产蛋期并且能够有效减少攻毒鸡只口咽、泄殖腔途径的排毒量,从而减少病毒在健康鸡群的传播感染机会。表明研制的基因VII型新城疫病毒样颗粒具有很大的防控潜力。
引文
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