利用黑曲霉外源表达系统表达黄曲霉AFLA-216基因编码的新蛋白
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- 论文作者：王千 ; 薛伟 ; 张浩 ; 李若瑜 ; 王敖全 ; 唐国敏 ; 刘伟
- 年：2016
- 作者机构：北京大学第一医院皮肤性病科;中国科学院微生物研究所;
- 论文关键词：唑类药物 ; 黑曲霉 ; 外源蛋白表达系统
- 会议召开时间：2016-08-19
- 会议录名称：中国菌物学会2016年学术年会论文摘要集
- 英文会议录名称：Abstracts of 2016 Mycological Society of China Annual Meeting
- 语种：中文
- 分类号：Q78
- 学会代码：ZGVL
- 会议名称：中国菌物学会2016年学术年会
- 会议地点：中国福建福州
- 主办单位：中国菌物学会
- 学会名称：中国菌物学会
- 页数：1
- 文件大小：633k
- 原文格式：D
- 会议级别：全国
摘要
基于本课题组前期确定的AFLA-216基因缺失可导致黄曲霉对唑类药物过度敏感的结果,我们首先构建了分泌型和胞内表达型两个不同的表达AFLA-216的载体;分泌型表达载体p GHE-AFLA216使用黑曲霉T21-201菌株的葡萄糖淀粉酶基因(gla A)的启动子,信号肽,AFLA-216基因融合在其下游并在蛋白C端引入his标签;胞内表达载体中不含有信号肽。通过原生质体-PEG介导的方法将将两个质粒分别转化T21-201。经PCR筛选获得成功整合AFLA216的黑曲霉转化子,在含有麦芽糖的液体发酵培养基中培养。分泌表达浓缩上清后,利用his标签抗体通过Western blot检测到重组AFLA-216蛋白,将其以Thermo Scientific Orbitrap Elite MS进行二级质谱蛋白鉴定,显示该重组蛋白中含有与AFLA-216蛋白相匹配的4个肽段、覆盖率为31.34%,表明已成功获得AFLA-216蛋白。胞内表达时,通过Western blot检测到菌体中含有重组AFLA-216蛋白,并存在于沉淀中。本研究为深入揭示该基因编码蛋白的功能和作用机制打下了基础。
引文