猪附红细胞体HspA1与DnaJ相互作用的双分子荧光互补研究

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• 论文作者：胡盼 ; 米荣升 ; 黄燕 ; 陆珂 ; 贾海燕 ; 程龙 ; 詹婷婷 ; 宋悦 ; 韩先干 ; 陈兆国
• 年：2016
• 作者机构：中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物产品质量安全生物性危害因子风险评估实验室(上海)农业部动物寄生虫学重点实验室;江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心;
• 论文关键词：猪附红细胞体 ; HspA1 ; HspA1表位区 ; DnaJ ; 蛋白相互作用
• 会议召开时间：2016-07-20
• 会议录名称：中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第五次学术研讨会论文集
• 语种：中文
• 分类号：S852.6
• 学会代码：SYGW
• 会议名称：中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第五次学术研讨会
• 会议地点：中国内蒙古通辽
• 主办单位：中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会
• 学会名称：中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会
• 页数：2
• 文件大小：498k
• 原文格式：D
• 会议级别：全国

摘要

猪附红细胞体病(eperythrozoonosis)是由附红细胞体(Mycoplasma spp.)寄生于红细胞表面、血浆及骨髓内而引起的一种传染性疾病,临床上以发热、贫血、黄疸为主要特征,给人的健康和畜牧业的发展造成了巨大的危害。猪附红细胞体Dna K样蛋白Hsp A1属于热休克蛋白Hsp70家族,具有免疫功能、ATPase活性和膜表面可接触性,很可能参与黏附到红细胞表面上。在大肠埃希氏菌中,Dna J的J-结构域能特异地与Dna K结合,刺激Dna K的ATP酶活性,协同完成对底物蛋白的ATP依赖的结合和释放。目前尚未见附红细胞体Dna J与Hsp A1一起组成Dna K/Dna J系统,在新合成蛋白的折叠和装配、蛋白聚集的抑制、已聚集蛋白的溶解和重折叠、蛋白的跨膜转位和降解中发挥重要作用的报道。为研究猪附红细胞体Dan K样蛋白Hsp A1与Dna J是否存在相互作用,采用双分子荧光互补技术进行检测。利用生物信息学软件预测Hsp A1的B细胞抗原表位和功能结构域,选取具有功能结构域且抗原表位富集的第388-609位区域为Hsp A1表位区。分别对Hsp A1编码基因a1、Hsp A1表位区编码基因a1-epi进行扩增,并克隆到p Bi FC-VC155载体中,同时将Dna J编码基因dnaj克隆到p Bi FC-VN155中,分别与上述重组质粒共转染293T细胞。结果成功地构建了含Hsp A1编码基因a1、Hsp A1表位区编码基因a1-epi、Dna J编码基因dnaj的真核重组表达质粒p Bi FC-VC155-a1、p Bi FC-VC155-a1-epi和p Bi FC-VN155-dnaj,共转染的293T细胞在荧光显微镜下均观察到绿色荧光,表明Hsp A1和Hsp A1表位区均与Dna J存在相互作用,且很可能存在2个作用位点。本研究为进一步探讨Hsp A1的生物学功能和作用机制提供了新的思路。

引文