蛋氨酸通过T1R1/T1R3激活C2C12成肌细胞mTOR信号

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• 论文作者：魏宏逵 ; 任娇 ; 郑溜丰 ; 彭健
• 年：2016
• 作者机构：华中农业大学动物科技学院;湖北省生猪健康养殖协同创新中心;
• 论文关键词：蛋氨酸 ; C2C12成肌细胞 ; mTORC1 ; T1R1/T1R3
• 会议召开时间：2016-10-21
• 会议录名称：中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十二次动物营养学术研讨会论文集
• 语种：中文
• 分类号：S816
• 学会代码：ZGXJ
• 会议名称：中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十二次动物营养学术研讨会
• 会议地点：中国湖北武汉
• 主办单位：中国畜牧兽医学会动物营养学分会
• 学会名称：中国畜牧兽医学会
• 页数：1
• 文件大小：52k
• 原文格式：O
• 会议级别：全国

摘要

本试验旨在筛选能够激活骨骼肌细胞内雷帕霉素靶蛋白复合物1(mTORC1)活性的特定氨基酸,并探讨味觉受体1家族1型/3型(T1R1/T1R3)在氨基酸激活mTORC1活性中的作用。选用C2C12成肌细胞为研究对象,饥饿处理后添加50 mmol/L不同L-氨基酸(丝氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、蛋氨酸、谷氨酰胺或甘氨酸)刺激细胞1 h,收集总蛋白,检测mTOR及其下游靶蛋白核糖体蛋白S6激酶1(S6K1)的磷酸化水平;检测蛋氨酸处理下胞内Ca~(2+)浓度及胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)磷酸化水平的变化。并研究Ca~(2+)螯合剂BAPTA-AM(10μmol/L)、T1R1/T1R3信号增强剂肌苷5′-单磷酸(IMP)(1 mM/L)及ERK1/2活性抑制剂U0126(15μmol/L)对蛋氨酸诱导mTOR激或的影响;最后在TIR1干扰的细胞中研究蛋氨酸对Ca~(2+)、ERK1/2和mTOR信号的影响。结果表明:1)只有蛋氨酸能极显著提高mTOR和S6K1的磷酸化水平(P<0.01),其他氨基酸效果不显著(P>0.05)。2)蛋氨酸处理显著增加胞内Ca~(2+)浓度(P<0.05),极显著提高ERK1/2的磷酸化水平(P<0.01)。3)在蛋氨酸刺激下,BAPTA-AM和U0126能够显著降低胞内Ca~(2+)浓度及ERK1/2磷酸化水平(P<0.05),同时极显著降低mTOR和S6K1的磷酸化水平(P<0.01)。4)与蛋氨酸处理相比,IMP处理能进一步提高mTOR和S6K1的磷酸化水平。在T1R1干扰的细胞中,蛋氨酸促进细胞内Ca~(2+)浓度、mTOR和S6K1活性提高的能力限制下降。以上结果提示,在所有待筛选的7种氨基酸中,只有蛋氨酸能激活C2C12成肌细胞内mTORC1活性,其调节作用是通过上调T1R1/T1R3-PLCβ-Ca2+-ERK1/2信号通路活性来实现的。

引文