AIM2通过炎症小体的形成与活化抑制肝细胞肝癌的进展
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摘要
目的:明确AIM2(absent in melanoma 2)对肝细胞肝癌(HCC)作用效应及其分子机制。方法:应用Real-time PCR和Western blot的方法检测AIM2在肝癌组织及其配对的非癌肝组织中的相对表达量,并用免疫组织化学染色的方法检测AIM2在肝癌组织中的定位表达。应用CCK-8和克隆形成实验检测AIM2过表达或表达缺失的肝癌细胞系的增殖和克隆形成能力,应用Transwell的方法检测AIM2对肝癌细胞侵袭、迁移能力的影响。应用ELISA检测细胞上清中IL-1β含量的变化。应用caspase-1底物剪切试剂盒检测细胞caspase-1的剪切活力变化,同时应用LDH释放实验检测细胞焦亡。应用western blot的方法检测炎症小体相关分子的表达与活化,以及mTORC1信号通路的活化。结果:相对于非癌肝组织,AIM2在肝癌组织中mRNA和蛋白水平的相对表达量均显著下调,且其相对表达量与肿瘤体积、大小、临床分期和病理分级等疾病相关的临床指标呈显著性负相关。体外过表达AIM2可以显著抑制肝癌细胞的增殖、克隆形成以及侵袭转移能力;相反,敲低AIM2的表达则可促进肝癌细胞的恶性行为。进一步的机制探索显示,体外过表达AIM2能够促进AIM2-ASC-Caspase-1炎症小体复合物的形成,并通过炎症小体的活化,抑制mTORC1信号通路的活化,而进一步发挥抑癌效应。裸鼠成瘤实验结果表明,过表达AIM2能够显著抑制HCC细胞系的成瘤性。结论:本研究揭示了AIM2能够在肝细胞肝癌中发挥抑癌效应,而这一效应是通过激活AIM2-ASCCaspase-1炎症小体,抑制mTORC1信号通路实现的。本研究结果提示,能够通过上调AIM2的表达以及开发靶向mTORC1信号通路的药物治疗AIM2缺失表达的HCC。
引文