豇豆花叶病毒属病毒广谱RT-PCR检测方法的建立
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- 论文作者：廖富荣 ; 林武镇 ; 方志鹏 ; 沈建国 ; 陈青 ; 陈红运
- 年：2016
- 作者机构：厦门出入境检验检疫局检验检疫技术中心;福建农林大学;福建出入境检验检疫局检验检疫技术中心;
- 论文关键词：豇豆花中病毒 ; RT-PCR ; 病毒鉴定
- 会议召开时间：2016-08-05
- 会议录名称：中国植物病理学会2016年学术年会论文集
- 英文会议录名称：Proceedings of the Annual Meeting of Chinese Society for Plant Pathology(2016)
- 语种：中文
- 分类号：S432.41
- 学会代码：ZGVS
- 会议名称：中国植物病理学会2016年学术年会
- 会议地点：中国江苏南京
- 主办单位：中国植物病理学会
- 学会名称：中国植物病理学会
- 页数：1
- 文件大小：40k
- 原文格式：O
- 会议级别：全国
摘要
根据RNA2的外壳蛋白基因保守区域设计简并引物(ComoV-2-F2/ComoV-2-R1),建立了豇豆花叶病毒属(Comovirus)的RT-PCR检测方法。利用该方法成功用于扩增9种豇豆花叶病毒属病毒(APMoV、BBTMV、BBSV、BPMV、CPMV、CPSMV、RCMV、RaMV和SqMV)的14个分离物,而不能从其他豇豆花叶病毒亚科病毒和健康寄主植物中扩增到预期大小条带,显示出良好的广谱性和特异性。通过在简并引物的5′端引入测序引物(ComoV-2-F2-M4/ComoV-2-R1-M1),成功进行PCR产物的直接测序,并且不会影响其通用性(图2B)。按1:10比例在PCR扩增中同时加入简并引物(ComoV-2-F2-M4/ComoV-2-R1-M1)和通用测序引物(M4/M1),结果表明,其灵敏度可以提高1 000倍。另外,在简并引物的5′端引入富含AT的非互补序列,在并未改变其通用性情况下,其灵敏度可以提高100倍。序列测定分析表明,测定的病毒序列与相应病毒均具有最高的序列同源性,可用于病毒种类的快速鉴定。该方法可用于豇豆花叶病毒属的广谱检测及病毒种类的快速鉴定,而且有利于新病毒种类的发现。
引文