摘要
目的:在化合物的前期抗炎活性筛选中,发现沉香中苯乙基色酮衍生物GYF-21具有很强的抑制LPS刺激小鼠小胶质细胞BV2产生NO的作用,可能具有较强的抗神经炎症作用,本研究对GYF-21抑制LPS诱导BV2细胞产生炎症反应的药效和作用机制进行系统研究,以寻找治疗以神经炎症为主要病理基础的神经疾病的药物先导化合物。方法:将处于对数生长期的BV2细胞接种到96孔板或6孔板中,利用系列浓度GYF-21处理BV2细胞1h后,加入LPS刺激BV2细胞。在LPS刺激24h后,利用Griess试剂检测96孔板中GYF-21对BV2细胞产生NO的抑制率。在LPS刺激6h后,收集6孔板中BV2细胞,提取mRNA,并进行逆转录和实时定量PCR检测i NOS、TNF-α、IL-6、IL-1β和MIP-1α的基因转录水平。在LPS刺激12h后,利用ELISA检测96孔板中BV2细胞上清液中TNF-α、IL-6、IL-1β和MIP-1α的释放量。在LPS刺激30min和3h后,利用Western blot检测NF-κB、MAPK和STAT1/3等炎症相关信号通路的活化情况。结果:GYF-21以剂量依赖性抑制LPS刺激BV2细胞产生NO,其抑制作用的IC50为2.1±0.02μM。RTPCR结果显示GYF-21在2.5μM以上浓度能够显著抑制i NOS、TNF-α、IL-6、IL-1β和MIP-1α的基因转录。ELISA结果显示GYF-21能够显著抑制TNF-α、IL-6、IL-1β和MIP-1α的分泌。Western blot结果显示GYF-21对STAT1/3的磷酸化以及I-κB、p65的过度活化都有显著的抑制作用。结论:GYF-21能够通过抑制STAT1/3和NF-κB信号通路发挥显著的抗炎作用,具有治疗以神经炎症为主要病理基础的神经疾病的重大潜力。
引文