刚地弓形虫TgAtg8-TgAtg3蛋白-蛋白相互作用的分子机制研究
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- 论文作者：胡月 ; 林佳鑫 ; 刘淑贤 ; 胡昕 ; 谭峰
- 年：2016
- 作者机构：温州医科大学寄生虫学教研室;温州医科大学热带医学研究所;
- 论文关键词：刚地弓形虫 ; 蛋白-蛋白相互作用 ; Atg8 ; Atg3 ; 重叠多肽阵列 ; 表面等离子共振
- 会议召开时间：2016-08-08
- 会议录名称：中国动物学会寄生虫学专业委员会第十届全国寄生虫学青年工作者学术研讨会论文摘要集
- 英文会议录名称：The Abstracts of the Tenth Symposium for Yong Scientists of China Society of Parasitology
- 语种：中文
- 分类号：R382.5
- 学会代码：JISC
- 会议名称：中国动物学会寄生虫学专业委员会第十届全国寄生虫学青年工作者学术研讨会
- 会议地点：中国四川成都
- 主办单位：中国动物学会寄生虫学专业青年委员会
- 学会名称：中国动物学会寄生虫学专业委员会
- 页数：1
- 文件大小：601k
- 原文格式：D
- 会议级别：全国
摘要
目的:探讨介导刚地弓形虫TgA tg8与TgA tg3蛋白相互作用的分子基础。方法:首先,我们根据TgA tg8蛋白空间结构,针对两个口袋结构域中特异性氨基酸位点分别进行突变,原核表达3种TgA tg8突变融合蛋白:HA-Tg Atg8R27E、HA-Tg Atg8D44A/K45S/K46A和HA-Tg Atg8△68-76,进而利用体外pull-down与Western blot实验分别检测上述TgA tg8突变蛋白与His×6-Tg Atg3融合蛋白的结合能力,以HA-Tg Atg8野生型蛋白作为对照,明确TgA tg8蛋白中介导Tg Atg8-TgA tg3蛋白-蛋白相互作用的氨基酸位点。与此同时,我们利用重叠多肽阵列方法筛选出TgA tg3蛋白中可能与TgA tg8蛋白发生结合的多肽片段;继而利用竞争性表面等离子共振(SPR)技术进一步验证筛选、验证具有阻断Tg Atg8-Tg Atg3结合的多肽;最后针对该多肽的特异性位点表达相应的TgA tg3点突变蛋白,以pull-down实验验证TgA tg3蛋白中,介导与Tg Atg8蛋白结合的氨基酸位点。结果:TgA tg8突变蛋白与Tg Atg3蛋白结合的实验结果表明:与对照组相比,Tg Atg8R27E和Tg Atg8△68-76突变蛋白与TgA tg3的结合能力显著下降。利用重叠多肽阵列技术筛选出TgA tg3蛋白中可与TgA tg8蛋白结合的4个TgA tg3多肽片段,对应氨基酸序列如下所示:163DVEGGWMLPLLN17、235DLINFADIDCLV246、346KVVDSWVESGVR357、376PTIEYDFTMDVD387;体外竞争性SPR结果表明,Tg Atg3235-246对Tg Atg8-Tg Atg3的阻断作用比较显著,该多肽中包括一段保守的AIM序列—FADI,推断该FADI序列可能是介导与TgA tg8结合的氨基酸序列。结论:初步阐明刚地弓形虫Tg Atg8-Tg Atg3蛋白-蛋白相互作用分子机制,为弓形虫病治疗药物的靶点研究提供理论依据。
引文